| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 材料与方法 | 第13-34页 |
| 1.实验材料 | 第13-16页 |
| 1.1 仪器设备 | 第13-14页 |
| 1.2 试剂来源 | 第14-16页 |
| 1.3 其他 | 第16页 |
| 2.研究方法 | 第16-34页 |
| 2.1 临床组织标本 | 第16-17页 |
| 2.2 细胞株及培养方法 | 第17页 |
| 2.3 瞬时转染 | 第17页 |
| 2.4 MTT比色法检测细胞活力 | 第17-18页 |
| 2.5 流式细胞术(PI单染法)检测结肠癌细胞周期 | 第18页 |
| 2.6 流式细胞术(Annexin-V/PI双染法)检测结肠癌细胞凋亡 | 第18页 |
| 2.7 Caspase3活性检测 | 第18-19页 |
| 2.8 克隆形成实验检测结肠癌细胞克隆形成能力 | 第19页 |
| 2.9 划痕实验检测结肠癌细胞的迁移能力 | 第19-20页 |
| 2.10 Transwell迁移实验检测结肠癌细胞的迁移能力 | 第20页 |
| 2.11 Transwell侵袭实验检测结肠癌细胞的侵袭能力 | 第20-21页 |
| 2.12 质粒构建 | 第21-24页 |
| 2.13 稳转细胞构建 | 第24-25页 |
| 2.14 RNA pull-down assay | 第25页 |
| 2.15 RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP) | 第25-26页 |
| 2.16 荧光素酶报告基因质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.17 双荧光素酶报告基因实验 | 第27-28页 |
| 2.18 RNA 提取和定量 PCR 实验 | 第28-30页 |
| 2.19 蛋白提取和Western Blot分析 | 第30-32页 |
| 2.20 裸鼠成瘤实验 | 第32-33页 |
| 2.21 统计学分析 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-52页 |
| 一、MIAT在结肠癌组织和结肠癌细胞系中表达上调 | 第34-35页 |
| 二、MIAT高表达与结肠癌病人的TNM分期、肿瘤分级和转移显著相关 | 第35-36页 |
| 三、干扰MIAT抑制结肠癌细胞增殖和克隆形成 | 第36-37页 |
| 四、干扰MIAT促进结肠癌细胞凋亡 | 第37-39页 |
| 五、干扰MIAT对结肠癌细胞周期无明显影响 | 第39-40页 |
| 六、干扰MIAT抑制结肠癌细胞侵袭转移 | 第40-42页 |
| 七、结肠癌组织中MIAT与 miR-132 的表达呈负相关 | 第42页 |
| 八、MIAT与 miR-132 相互作用 | 第42-45页 |
| 九、miR-132 靶向调控Derlin- | 第45-47页 |
| 十、miR-132 通过下调Derlin-1 促进结肠癌细胞凋亡并抑制癌细胞侵袭转移 | 第47-49页 |
| 十一、MIAT调节miR-132靶分子Derlin-1 的表达 | 第49页 |
| 十二、干扰MIAT抑制裸鼠移植瘤生长 | 第49-52页 |
| 分析与讨论 | 第52-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 文献综述 表观遗传变异与结肠癌的发生发展 | 第68-110页 |
| 参考文献 | 第83-110页 |
| 附录 | 第110-114页 |
| 溶液及培养基配方 | 第110-114页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
