| 个人简历 | 第3-8页 |
| 缩略词表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 前言 | 第19-26页 |
| 第一章 M3R拮抗剂抑制H1299 细胞生长增殖和迁移,诱导细胞产生周期阻滞 | 第26-41页 |
| 1.1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1.1 细胞 | 第26页 |
| 1.1.2 药品试剂 | 第26-27页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第27页 |
| 1.2 方法 | 第27-32页 |
| 1.2.1 溶液配制 | 第27-29页 |
| 1.2.2 细胞培养 | 第29页 |
| 1.2.3 SRB法测定细胞活力 | 第29-30页 |
| 1.2.4 实时无标记动态细胞分析 | 第30-31页 |
| 1.2.5 FCM法测定细胞周期 | 第31-32页 |
| 1.2.6 统计方法 | 第32页 |
| 1.3 结果 | 第32-38页 |
| 1.3.1 M3R拮抗剂R2-8018 和达非那新抑制H1299 细胞增殖 | 第32-34页 |
| 1.3.2 M1 受体选择性拮抗剂VU0255035对H1299 细胞的增殖无明显影响 | 第34页 |
| 1.3.3 外源性激动剂乙酰胆碱和卡巴胆碱对H1299 细胞增殖无明显影响 | 第34-35页 |
| 1.3.4 M3R拮抗剂R2-8018 抑制H1299 细胞迁移 | 第35-36页 |
| 1.3.5 M3R拮抗剂R2-8018 诱导H1299 细胞产生周期阻滞 | 第36-38页 |
| 1.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9 技术敲除H1299 细胞M3R基因并探究其对H1299 细胞生长增殖和迁移的影响 | 第41-61页 |
| 2.1 材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 细胞和质粒 | 第41页 |
| 2.1.2 药品试剂 | 第41页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-48页 |
| 2.2.1 gRNA活性检测 | 第42-44页 |
| 2.2.2 gRNA-Cas9 慢病毒载体构建及包装 | 第44-45页 |
| 2.2.3 慢病毒感染及混合细胞系的筛选 | 第45页 |
| 2.2.4 基因型及表达水平鉴定 | 第45-48页 |
| 2.2.5 统计方法 | 第48页 |
| 2.3 结果 | 第48-58页 |
| 2.3.1 gRNA活性检测结果 | 第48-50页 |
| 2.3.2 慢病毒感染及混合细胞系的筛选 | 第50-51页 |
| 2.3.3 基因型水平鉴定成功敲除M3R基因 | 第51-52页 |
| 2.3.4 Western Blot检测M3R蛋白表达水平 | 第52-53页 |
| 2.3.5 敲除M3R抑制H1299 细胞的生长活力 | 第53-54页 |
| 2.3.6 M3R拮抗剂R2-8018 和达非那新对H1299-M3R-KO增殖无明显抑制作用 | 第54页 |
| 2.3.7 外源性激动剂乙酰胆碱和卡巴胆碱对M3R敲除型H1299 细胞增殖无影响 | 第54-55页 |
| 2.3.8 敲除M3R抑制H1299 细胞迁移能力 | 第55-57页 |
| 2.3.9 敲除M3R诱导H1299 细胞产生周期阻滞 | 第57-58页 |
| 2.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 拮抗和敲除M3R抑制H1299 细胞增殖、迁移的机制研究 | 第61-88页 |
| 3.1 材料 | 第63-65页 |
| 3.1.1 细胞 | 第63-64页 |
| 3.1.2 药品试剂 | 第64页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第64-65页 |
| 3.2 方法 | 第65-74页 |
| 3.2.1 溶液配制 | 第65-66页 |
| 3.2.2 抗体芯片检测蛋白表达 | 第66-71页 |
| 3.2.3 Western Blot检测蛋白表达 | 第71-74页 |
| 3.2.4 统计方法 | 第74页 |
| 3.3 结果 | 第74-84页 |
| 3.3.1 拮抗和敲除M3R后抗体芯片检测H1299 细胞MAPK与PI3K/AKT通路相关蛋白表达情况 | 第74-76页 |
| 3.3.2 拮抗和敲除M3R下调H1299 细胞PKC-α和 P38MAPK蛋白的表达水平 | 第76-77页 |
| 3.3.3 拮抗和敲除M3R抑制EGFR磷酸化 | 第77页 |
| 3.3.4 拮抗和敲除M3R抑制MEK/ERK/1/2 通路活性 | 第77-78页 |
| 3.3.5 拮抗和敲除M3R对 H1299 细胞抑制PI3K/AKT信号通路活性 | 第78-80页 |
| 3.3.6 拮抗和敲除M3R对 H1299 细胞调控细胞周期相关蛋白分子的影响 | 第80-83页 |
| 3.3.7 拮抗和敲除M3R下调MMP2 蛋白水平 | 第83-84页 |
| 3.4 讨论 | 第84-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 综述 | 第96-103页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 附件 | 第105-109页 |
