| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 黄瓜霜霉病抗性机制的研究 | 第12页 |
| 1.2 几种防卫相关基因在植物防卫中的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 14-3-3蛋白(14-3-3 proteins) | 第12-13页 |
| 1.2.2 金属硫蛋白(MT) | 第13页 |
| 1.2.3 肌醇半乳糖苷合成酶(GS) | 第13-14页 |
| 1.2.4 过敏性诱导反应蛋白(HIR) | 第14页 |
| 1.2.5 蛋白酶抑制剂(PIs和WPI) | 第14-15页 |
| 1.2.6 类甜蛋白(TLPs) | 第15-16页 |
| 1.2.7 病原菌调控蛋白(CuPi1) | 第16-17页 |
| 1.2.8 病程相关蛋白(NtPRp27) | 第17页 |
| 1.3 本试验研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 几种防卫相关基因的序列特征及在接种霜霉菌后的qPCR分析 | 第18-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.1 黄瓜种质 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备仪器 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 材料的处理 | 第18页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR引物设计 | 第18-20页 |
| 2.2.3 黄瓜叶片总RNA的提取及反转录 | 第20-21页 |
| 2.2.4 总RNA的质量检测 | 第21页 |
| 2.2.5 RNA的纯化和反转录 | 第21-22页 |
| 2.2.6 普通PCR扩增检测引物 | 第22页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR | 第22页 |
| 2.2.8 统计方法 | 第22页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-36页 |
| 2.3.1 黄瓜总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.3.2 qPCR引物特异性检测 | 第23-25页 |
| 2.3.3 内参基因的实时荧光定量PCR分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 14-3-3蛋白家族序列特征及在接种霜霉菌后的表达分析 | 第26-33页 |
| 2.3.5 其它10个与抗逆相关的基因在霜霉菌侵染前期的表达情况 | 第33-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 2.4.1 14-3-3蛋白在接种霜霉菌后的表达分析 | 第36-37页 |
| 2.4.2 其它几种防卫相关蛋白在接种霜霉菌后的表达分析 | 第37-38页 |
| 第三章 几种基因的原核表达及多克隆抗体制备 | 第38-64页 |
| 3.1 试验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 载体与菌株 | 第38页 |
| 3.1.2 试验仪器及设备 | 第38页 |
| 3.1.3 主要酶及试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制: | 第38-41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第41页 |
| 3.2.2 PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.3 PCR产物的回收纯化 | 第42页 |
| 3.2.4 制备感受态细胞 | 第42-43页 |
| 3.2.5 双酶切反应 | 第43页 |
| 3.2.6 连接pET28a载体 | 第43页 |
| 3.2.7 质粒DNA转化 | 第43页 |
| 3.2.8 质粒提取 | 第43-44页 |
| 3.2.9 质粒PCR鉴定 | 第44页 |
| 3.2.10 转化 | 第44页 |
| 3.2.11 重组蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.2.12 重组蛋白表达条件的优化 | 第45-46页 |
| 3.2.13 重组蛋白的纯化 | 第46页 |
| 3.2.14 生物信息学分析 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-62页 |
| 3.3.1 CsCuPi1、CsPI-F4、CsNtPRp27、CsGS基因的原核表达 | 第46-49页 |
| 3.3.2 CsPI基因的原核表达及多可隆抗体的制备 | 第49-54页 |
| 3.3.3 CsTLP基因的原核表达及多可隆抗体的制备 | 第54-57页 |
| 3.3.4 CsHirp基因的原核表达及多可隆抗体的制备 | 第57-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 CsHirp1蛋白的Western blot分析 | 第64-68页 |
| 4.1 试剂及仪器 | 第64页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第64页 |
| 4.1.2 主要试剂的配制: | 第64页 |
| 4.1.3 主要仪器及设备 | 第64页 |
| 4.2 试验方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 黄瓜叶片蛋白的提取 | 第65页 |
| 4.2.2 Western blot鉴定 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-66页 |
| 4.3.1 抗体的特异性检测 | 第65-66页 |
| 4.3.2 Western blot法检测霜霉菌对CsHirpl表达的影响 | 第66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
