| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| ·细小病毒B19的感染性和自主免疫 | 第11-14页 |
| ·细小病毒B19介绍 | 第11-12页 |
| ·细小病毒B19的流行病学及传播 | 第12页 |
| ·B19感染过程及检测 | 第12-13页 |
| ·B19感染的临床表现及诊断 | 第13页 |
| ·B19感染及自主免疫 | 第13-14页 |
| ·细小病毒B19-VP1U的sPLA2活性研究 | 第14-16页 |
| ·磷脂酶A2家族及结构功能 | 第14页 |
| ·细小病毒VP1u的sPLA2活性的研究 | 第14-15页 |
| ·细小病毒B19-VP1U sPLA2活性的研究 | 第15-16页 |
| ·PMALTM原核表达系统 | 第16-20页 |
| ·pMALTM表达系统简介 | 第16-17页 |
| ·pMALTM系统的相关信息 | 第17-18页 |
| ·运用pMALTM系统进行本实验具体的方案 | 第18-20页 |
| ·测定sPLA2活性的原理 | 第20-21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第22-31页 |
| ·实验仪器及其相关设备 | 第22页 |
| ·主要实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·药品及所用的相关试剂 | 第22页 |
| ·提取质粒所用的溶液及其配制的方法 | 第22页 |
| ·培养细菌所用的培养基及其配制的方法 | 第22-23页 |
| ·常用缓冲液及其配制的方法 | 第23页 |
| ·纯化蛋白所用溶液及其配制的方法 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·氯化锂法提取质粒DNA | 第24页 |
| ·PCR扩增VP1u截短后的基因片段 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的回收与纯化：根据试剂盒上的说明书进行操作 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·构建VP1u截短后的重组突变载体 | 第26页 |
| ·筛选、鉴定阳性克隆 | 第26-27页 |
| ·VP1u的N端与C端截短突变蛋白的诱导表达及检测 | 第27-28页 |
| ·VP1u的N端与C端截短突变蛋白的分离纯化 | 第28-29页 |
| ·Bradford法测定VP1u的N端与C端截短突变蛋白浓度 | 第29页 |
| ·磷脂酶A2活性检测 | 第29-31页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第31-45页 |
| ·VP1u的N端截短突变重组载体的构建及检测 | 第31-32页 |
| ·VP1u的N端截短突变基因片段的PCR扩增 | 第31页 |
| ·VP1u的N端截短突变重组载体的双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·VP1u的N端截短突变蛋白的诱导表达及纯化 | 第32-36页 |
| ·VP1u的N端截短突变蛋白的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·诱导表达VP1u的N端截短突变蛋白的Western-blot验证 | 第33-34页 |
| ·VP1u的N端截短突变蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| ·VP1u的C端截短突变重组载体的构建及检测 | 第36-37页 |
| ·VP1u的C端截短突变基因片段的PCR扩增 | 第36页 |
| ·VP1u的C端截短突变重组载体的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·VP1u的C端截短突变蛋白的诱导表达及纯化 | 第37-41页 |
| ·VP1u的C截短突变蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·诱导表达VP1u的C端截短突变蛋白的Western-blot验证 | 第38页 |
| ·VP1u的C端截短突变蛋白的纯化 | 第38-41页 |
| ·测定磷脂酶A2的活性 | 第41-45页 |
| ·测定VP1u的N端截短突变融合蛋白的sPLA2活性 | 第41-42页 |
| ·测定VP1u的C端截短突变融合蛋白的sPLA2活性 | 第42-45页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
