| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.飞蝗的生殖 | 第11-12页 |
| 1.1 飞蝗生殖的特点 | 第11页 |
| 1.2 飞蝗生殖的激素调控 | 第11-12页 |
| 2.保幼激素早期响应基因Kr-h1 | 第12-13页 |
| 3.microRNA的研究进展 | 第13-19页 |
| 3.1 miRNA的形成及特点 | 第13-14页 |
| 3.2 miRNA的研究方法 | 第14-15页 |
| 3.3 miRNA的功能 | 第15-19页 |
| 第二章 筛选和鉴定调控Kr-h1的miRNA | 第19-35页 |
| 1.引言 | 第19-20页 |
| 2.材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 飞蝗的饲养 | 第20页 |
| 2.2 飞蝗的解剖 | 第20页 |
| 2.3 miRNA靶基因的生物信息学预测 | 第20页 |
| 2.4 载体构建 | 第20-21页 |
| 2.5 细胞转染 | 第21页 |
| 2.6 双萤光素酶分析实验(Dual-Luciferase Assay) | 第21-22页 |
| 2.7 突变miRNA的靶位点 | 第22-24页 |
| 2.8 飞蝗内源JH的剥夺和JHA的处理 | 第24页 |
| 2.9 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.10 mRNA反转录 | 第25页 |
| 2.11 miRNA提取 | 第25页 |
| 2.12 miRNA反转录 | 第25页 |
| 2.13 荧光定量PCR | 第25-28页 |
| 3.结果 | 第28-33页 |
| 3.1 飞蝗脂肪体miRNA表达谱的测定和分析 | 第28-29页 |
| 3.2 鉴定和靶基因Kr-h1结合的miRNA | 第29-32页 |
| 3.3 let-7a和miR-278及其靶基因Kr-h1的时序表达模式 | 第32-33页 |
| 4.讨论 | 第33-34页 |
| 5.结论 | 第34-35页 |
| 第三章 miRNA对其靶标基因Kr-h1的分子调控机制 | 第35-49页 |
| 1.引言 | 第35-36页 |
| 2.材料与方法 | 第36-40页 |
| 2.1 RNA免疫共沉淀 | 第36-37页 |
| 2.2 agomiR注射 | 第37页 |
| 2.3 组织解剖 | 第37-38页 |
| 2.4 总RNA的提取 | 第38页 |
| 2.5 mRNA反转录 | 第38页 |
| 2.6 miRNA提取 | 第38页 |
| 2.7 miRNA反转录 | 第38页 |
| 2.8 荧光定量PCR | 第38页 |
| 2.9 组织蛋白提取 | 第38-39页 |
| 2.10 Western blot | 第39-40页 |
| 3.结果 | 第40-45页 |
| 3.1体内验证let-7a和miR-278的靶基因Kr-h1 | 第40-41页 |
| 3.2 let-7a和miR-278调控飞蝗生殖的分子机制 | 第41-44页 |
| 3.3 Kr-h1上let-7a和miR-278结合位点的保守性分析 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-46页 |
| 5.结论 | 第46-49页 |
| 第四章 总结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
