| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1. 前言 | 第9-12页 |
| 2. 材料和方法 | 第12-29页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第12-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-29页 |
| 2.2.1 细胞系的选择及突变点位置确定 | 第17-18页 |
| 2.2.2 sgRNA及HR模板设计 | 第18-19页 |
| 2.2.3 pSpCas9(BB)-2A-GFP(PX458)质粒验证 | 第19-20页 |
| 2.2.4 sgRNA与PX458质粒连接 | 第20-22页 |
| 2.2.5 sgRNA-PX458质粒转染HEK293T细胞 | 第22-23页 |
| 2.2.6 T7EI酶切分析 | 第23-24页 |
| 2.2.7 混合池BRAF V600E突变检测 | 第24-25页 |
| 2.2.8 混合池细胞流式分选、单克隆培养 | 第25页 |
| 2.2.9 单克隆细胞BRAF V600E突变检测 | 第25-29页 |
| 3. 结果 | 第29-36页 |
| 3.1 pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒单、双酶切验证 | 第29页 |
| 3.2 sgRNA-pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒测序 | 第29-30页 |
| 3.3 重组质粒转染HEK293T细胞显微镜下图片 | 第30-32页 |
| 3.4 T7EI酶切分析 | 第32-33页 |
| 3.5 混合池BRAF V600E突变检测 | 第33-34页 |
| 3.6 单克隆细胞BRAF V600E突变筛选 | 第34-35页 |
| 3.7. Sanger测序结果 | 第35-36页 |
| 4. 讨论 | 第36-40页 |
| 5. 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 综述 | 第44-55页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录一 | 第55-56页 |
| 附录二 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
