| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第16-23页 |
| 0.1 A型肉毒毒素 | 第16-19页 |
| 0.1.1 A型肉毒毒素的结构与功能 | 第16-17页 |
| 0.1.2 A型肉毒毒素的作用机制 | 第17-18页 |
| 0.1.3 A型肉毒毒素的应用 | 第18-19页 |
| 0.2 A型肉毒毒素受体 | 第19-22页 |
| 0.2.1 神经节苷脂 | 第19-20页 |
| 0.2.2 突触囊泡蛋白 | 第20-21页 |
| 0.2.3 成纤维生长因子受体3 | 第21-22页 |
| 0.3 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第1章 BoNT/A与受体FGFR3结合位点研究 | 第23-35页 |
| 1.1 前言 | 第23页 |
| 1.2 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.1 质粒、菌株、纯化蛋白 | 第23-24页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.2.3 主要溶液 | 第24页 |
| 1.2.4 仪器及耗材 | 第24页 |
| 1.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 1.3.1 ELISA检测BoNT/A和FGFR3的相互作用 | 第24-25页 |
| 1.3.2 BoNT/AHc-FGFR3D23复合物晶体的制备 | 第25页 |
| 1.3.3 截短突变筛选 | 第25-26页 |
| 1.3.4 肽库筛选 | 第26页 |
| 1.3.5 肽空间结构分析 | 第26-27页 |
| 1.3.6 小肽截短筛选 | 第27页 |
| 1.4 实验结果 | 第27-34页 |
| 1.4.1 BoNT/A和FGFR3的相互作用 | 第27-28页 |
| 1.4.2 BoNT/AHc与FGFR3复合物晶体的制备 | 第28-29页 |
| 1.4.3 截短突变筛选 | 第29-31页 |
| 1.4.4 肽库筛选 | 第31页 |
| 1.4.5 肽空间位置分析 | 第31-33页 |
| 1.4.6 小肽截短筛选 | 第33-34页 |
| 1.5 讨论 | 第34-35页 |
| 第2章 BoNT/A与FGFR3的分子对接及表位分析 | 第35-50页 |
| 2.1 前言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.2.1 蛋白质晶体结构 | 第35-36页 |
| 2.2.2 计算环境 | 第36页 |
| 2.2.4 菌株 | 第36页 |
| 2.2.5 主要试剂 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-39页 |
| 2.3.1 受体FGFR3非限制(unblocked)状态下的分子对接 | 第36-37页 |
| 2.3.2 受体FGFR3限制(blocked)状态下的分子对接 | 第37页 |
| 2.3.3 对接模型验证 | 第37-39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-49页 |
| 2.4.1 受体FGFR3表位非限制(unblocked)状态下的分子对接 | 第39-42页 |
| 2.4.2 受体FGFR3表位限制(blocked)状态下的分子对接 | 第42-44页 |
| 2.4.3 Pose14和Pose155两个对接模型的分子间相互作用分析 | 第44-46页 |
| 2.4.4 分子对接模型的验证 | 第46-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-50页 |
| 第3章 BoNT/A不同亚型毒力差异分析 | 第50-71页 |
| 3.1 前言 | 第50-51页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第51-52页 |
| 3.2.1 质粒、菌株、细胞株、小鼠 | 第51页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第51页 |
| 3.2.3 主要溶液 | 第51页 |
| 3.2.4 仪器及耗材 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-59页 |
| 3.3.1 BoNT/A2、A4质粒的构建及表达鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.2 BoNTA1、A2、A4毒力差异鉴定 | 第53页 |
| 3.3.3 BoNT/A不同亚型氨基酸序列同源性分析 | 第53页 |
| 3.3.4 BoNT/A4L表达质的粒构建、表达与纯化 | 第53-55页 |
| 3.3.5 BoNT/A1与BONT/A4的轻链活性比较 | 第55-56页 |
| 3.3.6 BoNT/A1、A4嵌合体的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.7 BoNTA1、A4嵌合体的表达及活性测定 | 第57-58页 |
| 3.3.8 建立细胞测活模型 | 第58-59页 |
| 3.4 实验结果 | 第59-69页 |
| 3.4.1 BoNT/A2、A4质粒的构建及表达 | 第59-60页 |
| 3.4.2 BoNT/A1、A2、A4毒力差异鉴定 | 第60-61页 |
| 3.4.3 BoNT/A不同亚型氨基酸序列同源性分析 | 第61-63页 |
| 3.4.4 BoNT/A4LC表达质粒的构建、表达鉴定与纯化 | 第63-65页 |
| 3.4.5 BoNTA1/BONTA4的LC活性比较 | 第65-66页 |
| 3.4.6 BoNTA1、A4嵌合体的构建 | 第66页 |
| 3.4.7 BoNTA1、A4嵌合体的表达及活性测定 | 第66-68页 |
| 3.4.8 细胞测活模型 | 第68-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-71页 |
| 第4章 BoNT/A受体与毒力关系探究 | 第71-84页 |
| 4.1 前言 | 第71页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第71-72页 |
| 4.2.1 质粒、菌株、动物 | 第71页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第71页 |
| 4.2.3 主要溶液 | 第71页 |
| 4.2.4 仪器及耗材 | 第71-72页 |
| 4.3 实验方法 | 第72-75页 |
| 4.3.1 BoNT/A突变体(GT1b6T、SV2C5T)的表达及活性测 | 第72页 |
| 4.3.2 受体SV2C抗体的制备 | 第72-73页 |
| 4.3.3 受体FGFR3抗体的制备 | 第73-74页 |
| 4.3.4 抗体阻断实验 | 第74-75页 |
| 4.4 结果 | 第75-82页 |
| 4.4.1 突变体BoNT/A(GT1b6T、SV2C5T)的表达及活性检测 | 第75-76页 |
| 4.4.2 SV2C抗体的制备 | 第76-78页 |
| 4.4.3 FGFR3抗体的制备 | 第78-81页 |
| 4.4.4 抗体阻断实验 | 第81-82页 |
| 4.5 讨论 | 第82-84页 |
| 第5章 结论与展望 | 第84-86页 |
| 5.1 结论 | 第84-85页 |
| 5.2 下一步工作计划 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录 A 试剂及其配制一览表 | 第91-94页 |
| 附录 B 主要仪器与耗材一览表 | 第94-96页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第96-97页 |
