| 摘要 | 第4-11页 |
| Abstract | 第11-20页 |
| 英文缩略语 | 第21-26页 |
| 第一部分：EMAP-Ⅱ通过MIR-429直接调控血肿瘤屏障通透性的作用机制研究 | 第26-45页 |
| 1 前言 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 实验细胞株 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 体外血肿瘤屏障的建立 | 第30页 |
| 2.2.3 构建miR-429过表达和表达沉默稳定转染体外血脑屏障模型 | 第30页 |
| 2.2.4 实验设计及分组 | 第30页 |
| 2.2.5 TEER的测定 | 第30页 |
| 2.2.6 HRP渗透率的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.7 Westernblot | 第31页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第31页 |
| 2.2.9 实时定量聚合酶链反应 | 第31页 |
| 2.2.10 双荧光素酶报告基因分析 | 第31-32页 |
| 2.3 统计学方法 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-41页 |
| 3.1 EMAPⅡ作用于BTB模型,增高其透过性,呈时间和剂量依赖 | 第33-34页 |
| 3.2 EMAPⅡ作用于BTB模型,降低肿瘤血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、OCCLUDIN和CLAUDIN-5的蛋白表达,呈时间依赖 | 第34页 |
| 3.3 MIR-429在人脑微血管内皮细胞中内源性表达,且在人胶质瘤血管内皮细胞中表达显著下调；MIR-429在不同级别胶质瘤组织中均低表达,且与胶质瘤病理级别显著负相关 | 第34-35页 |
| 3.4 EMAPⅡ作用于BTB模型,肿瘤血管内皮细胞中MIR-429表达量显著增高 | 第35-36页 |
| 3.5 分别稳定转染MIR-429过表达和表达沉默后的,验证MIR-429表达量 | 第36页 |
| 3.6 肿瘤血管内皮细胞过表达MIR-429使BTB模型TEER值显著降低,HRP透过率显著增高；肿瘤血管内皮细胞MIR-429表达沉默使BTB模型的TEER值显著增高,HRP透过率显著降低 | 第36-37页 |
| 3.7 过表达MIR-429使GECS紧密连接相关蛋白OCCLUDIN、ZO-1、CLAUDIN-5的蛋白表达显著降低,由连续分布变为不连续分布；表达沉默使紧密连接相关蛋白OCCLUDIN、ZO-1、CLAUDIN-5的蛋白表达显著增高,连续性增强 | 第37-38页 |
| 3.8 紧密连接相关蛋白OCCLUDIN、ZO-1、CLAUDIN-5是MIR-429的靶基因 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 第二部分：MIR-429对胶质瘤微血管内皮细胞生物学行为的影响 | 第45-65页 |
| 1 前言 | 第45-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 2.1.1 实验细胞株 | 第46页 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第48-49页 |
| 2.2.2 体外血肿瘤屏障的建立 | 第49页 |
| 2.2.3 构建p70S6K过表达和表达沉默稳定转染体外血脑屏障模型 | 第49页 |
| 2.2.4 实验设计及分组 | 第49页 |
| 2.2.5 TEER的测定 | 第49-50页 |
| 2.2.6 HRP渗透率的测定 | 第50页 |
| 2.2.7 Westernblot | 第50页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第50页 |
| 2.2.9 实时定量聚合酶链反应 | 第50-51页 |
| 2.2.10 双荧光素酶报告基因分析 | 第51页 |
| 2.3 统计学方法 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-62页 |
| 3.1 EMAPⅡ作用于BTB模型,降低血管内皮细胞中P70S6K的蛋白水平表达,呈时间依赖 | 第52页 |
| 3.2 P70S6K是MIR-429的靶基因,MIR-429反向调控P70S6K的表达 | 第52-53页 |
| 3.3 分别稳定转染P70S6K过表达和表达沉默质粒后的,验证P70S6K表达量 | 第53-54页 |
| 3.4 肿瘤血管内皮细胞过表达P70S6K使BTB模型TEER值显著增高,HRP透过率显著显著降低；肿瘤血管内皮细胞P70S6K表达沉默使BTB模型的TEER值显著显著降低,HRP透过率显著增高 | 第54-55页 |
| 3.5 肿瘤血管内皮细胞过表达p70S6K使紧密连接相关蛋白 Occludin、ZO-1、Claudin-5的表达显著增高；内皮细胞p70S6K表达沉默使紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-5的表达显著降低，由连续分布变为不连续分布 | 第55-56页 |
| 3.6 分别建立MIR-429和P70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型,验证MIR-429表达量 | 第56-57页 |
| 3.7 针对MIR-429和P70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型,应用TEER和HRP检测BTB通透性的变化 | 第57-58页 |
| 3.8 针对MIR-429和P70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型,应用WESTERNBLOT检测上述内皮细胞所建立BTB模型中内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、OCCLUDIN和CLAUDIN-5三种蛋白表达水平的变化 | 第58-59页 |
| 3.9 针对MIR-429和P70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型,应用WESTERNBLOT检测上述内皮细胞所建立BTB模型中P70S6K、P-P70S6K、S6、P-S6的蛋白表达水平的变化 | 第59-61页 |
| 3.10 分别应用p70S6K和S6的磷酸化抑制剂AT7868以及BI-D1870应用于miR-429过表达或表达沉默稳定转染内皮细胞系，应用Western blot检测上述内皮细胞所建立BTB模型的内皮细胞中紧密连接相关蛋白 ZO-1、Occludin和Claudin-5三种蛋白表达水平的变化 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 综述 | 第73-83页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简介 | 第85页 |
