| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 甾体概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 甾体化合物 | 第10-11页 |
| 1.1.2 甾体激素类药物 | 第11-12页 |
| 1.2 甾体化合物的生物转化 | 第12-16页 |
| 1.2.1 甾体生物转化的研究历程 | 第13-14页 |
| 1.2.2 甾体生物转化的原料 | 第14页 |
| 1.2.3 甾体化合物生物转化的类型 | 第14-15页 |
| 1.2.4 甾体生物转化法的特点 | 第15-16页 |
| 1.3 植物甾醇的微生物代谢途径 | 第16-20页 |
| 1.3.1 甾醇初步氧化 | 第17页 |
| 1.3.2 甾醇侧链降解 | 第17-19页 |
| 1.3.3 甾醇母核氧化 | 第19-20页 |
| 1.3.4 甾醇母核断裂 | 第20页 |
| 1.4 植物甾醇代谢的产物 | 第20-21页 |
| 1.5 课题的研究意义 | 第21-22页 |
| 1.6 课题的主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂及材料 | 第24-25页 |
| 2.1.4 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.5 实验相关引物 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 分枝杆菌LY-1的培养 | 第28页 |
| 2.2.2 分枝杆菌LY-1基因组的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 基因组的文库构建与测序 | 第28页 |
| 2.2.4 qRT-PCR实验方案 | 第28-30页 |
| 2.2.5 甾醇代谢关键基因片段的扩增 | 第30页 |
| 2.2.6 甾醇代谢关键基因片段酶切反应体系 | 第30-31页 |
| 2.2.7 甾醇代谢关键基因片段连接反应体系 | 第31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌的转化与鉴定 | 第31页 |
| 2.2.9 分枝杆菌LY-1电转感受态制备 | 第31-32页 |
| 2.2.10 关键基因表达质粒的电转化 | 第32页 |
| 2.2.11 多个基因表达质粒的构建 | 第32页 |
| 2.2.12 多基因过表达质粒电转化 | 第32页 |
| 2.2.13 培养基组分的优化 | 第32页 |
| 2.2.14 正交实验设计 | 第32-33页 |
| 2.2.15 培养条件的优化 | 第33页 |
| 2.2.16 分析方法 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-56页 |
| 3.1 分枝杆菌LY-1的全基因组测序及初步分析 | 第34-38页 |
| 3.1.1 分枝杆菌LY-1全基因组测序结果 | 第34页 |
| 3.1.2 分枝杆菌LY-1全基因组基因功能注释 | 第34-35页 |
| 3.1.3 分枝杆菌LY-1全基因组基因COG功能分析 | 第35-36页 |
| 3.1.4 分枝杆菌LY-1甾醇代谢相关酶基因的分析 | 第36-38页 |
| 3.2 甾醇代谢途径关键酶的确定 | 第38-41页 |
| 3.2.1 差异转录水平分析时间点的选取 | 第38页 |
| 3.2.2 甾醇代谢相关酶基因的转录水平分析 | 第38-41页 |
| 3.3 分枝杆菌LY-1的代谢工程改造 | 第41-47页 |
| 3.3.1 分枝杆菌关键酶基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.2 关键酶基因单一增强表达质粒的构建 | 第42页 |
| 3.3.3 增强表达重组菌株的构建及验证 | 第42-44页 |
| 3.3.4 关键酶基因组合增强表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.5 关键酶基因组合增强表达菌株的构建及发酵验证 | 第45-47页 |
| 3.4 重组菌株的转化工艺优化 | 第47-56页 |
| 3.4.1 碳源对菌体转化的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.2 氮源对菌体转化的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.3 磷酸盐对菌体转化的影响 | 第49页 |
| 3.4.4 金属离子对菌体转化的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.5 正交试验设计 | 第50-51页 |
| 3.4.6 分枝杆菌产9α-OH-AD的培养条件优化 | 第51-53页 |
| 3.4.7 底物投料浓度对重组菌转化的影响 | 第53-56页 |
| 主要结论与展望 | 第56-58页 |
| 主要结论 | 第56页 |
| 展望 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第65-66页 |
| 附录2：关键基因的编码序列 | 第66-68页 |
