| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 研究背景与意义 | 第10-11页 |
| 1.2 MCP-1 及其受体CCR2的研究进展与现状 | 第11-12页 |
| 1.2.1 MCP-1 研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 MCP-1/CCR2与肿瘤的关系 | 第12页 |
| 1.3 MAPK/ERK信号通路与乳腺癌转移 | 第12-14页 |
| 1.4 EMT与肿瘤的侵袭转移 | 第14-15页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 MCP-1 在乳腺癌MCF-7 细胞迁移和表型改变中作用研究 | 第16-32页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.2.1 细胞 | 第16页 |
| 2.2.2 Transwell小室 | 第16页 |
| 2.2.3 主要试剂及溶液配制 | 第16-19页 |
| 2.2.3.1 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.2.3.2 主要溶液配制 | 第17-19页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.3.1 MCF-7 细胞培养 | 第20页 |
| 2.3.1.1 细胞复苏 | 第20页 |
| 2.3.1.2 细胞传代与接板 | 第20页 |
| 2.3.1.3 细胞冻存 | 第20页 |
| 2.3.2 细胞划痕实验 | 第20-21页 |
| 2.3.3 Transwell小室实验 | 第21-22页 |
| 2.3.3.1 铺胶 | 第21页 |
| 2.3.3.2 接种细胞 | 第21页 |
| 2.3.3.3 固定 | 第21页 |
| 2.3.3.4 染色 | 第21-22页 |
| 2.3.3.5 观察并统计 | 第22页 |
| 2.3.4 细胞免疫荧光检测 | 第22-23页 |
| 2.3.5 细胞骨架染色 | 第23-24页 |
| 2.3.6 Western Blot | 第24-27页 |
| 2.3.6.1 总蛋白提取 | 第24页 |
| 2.3.6.2 蛋白浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.3.6.3 蛋白变性 | 第25页 |
| 2.3.6.4 SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| 2.3.6.5 转膜 | 第26页 |
| 2.3.6.6 免疫标记 | 第26-27页 |
| 2.3.6.7 显色 | 第27页 |
| 2.4 实验结果 | 第27-31页 |
| 2.4.1 MCP-1 对MCF-7 细胞迁移和侵袭行为的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.2 MCP-1 对MCF-7 细胞形态及EMT发生的影响 | 第28-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31页 |
| 2.6 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 MCP-1 诱导MCF-7 细胞迁移和EMT发生的分子机制初探 | 第32-52页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-35页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.2 常用试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2.3 主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.3.1 Western Blot检测 | 第35-36页 |
| 3.3.1.1 蛋白提取 | 第35-36页 |
| 3.3.1.2 SDS-PAGE、转膜、免疫标记 | 第36页 |
| 3.3.2 免疫荧光分析 | 第36页 |
| 3.3.3 Real-time PCR检测 | 第36-39页 |
| 3.3.3.1 细胞处理 | 第36页 |
| 3.3.3.2 提取细胞总RNA | 第36-37页 |
| 3.3.3.4 PCR反应体系 | 第37-39页 |
| 3.3.4 明胶酶谱分析MMP-2/9 的表达与活性 | 第39页 |
| 3.3.5 ELISA分析VEGF的表达 | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-50页 |
| 3.4.1 MCP-1 促进Snail的表达及其入核转运 | 第40-41页 |
| 3.4.2 MCP-1 通过ERK信号途径促进Snail的稳定 | 第41-46页 |
| 3.4.3 MCP-1 通过抑制GSK-3β 的活性来促进细胞迁移和侵袭 | 第46-48页 |
| 3.4.4 MCP-1 部分通过PI3K/AKT信号通路抑制GSK-3β 的活性 | 第48-49页 |
| 3.4.5 MCP-1 通过ERK/GSK-3β 途径调控MMP-2/9 活性和VEGF表达 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 全文总结 | 第52-53页 |
| 4.1 总结 | 第52页 |
| 4.2 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第59-60页 |
