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环形泰勒虫TaSP重组蛋白间接ELISA诊断方法的建立

缩略词表第4-5页
致谢第5-9页
摘要第9-10页
第一章 文献综述第10-16页
    1.1 环形泰勒虫病第10-11页
        1.1.1 病原学分类第10页
        1.1.2 病原学特征第10页
        1.1.3 生活史第10-11页
        1.1.4 流行病学第11页
        1.1.5 临床症状第11页
    1.2 环形泰勒虫诊断方法的研究进展第11-14页
        1.2.1 病原体检查诊断第11-12页
            1.2.1.1 血涂片显微镜检第11页
            1.2.1.2 淋巴结穿刺第11-12页
            1.2.1.3 动物接种法第12页
        1.2.2 血清学检测第12-13页
            1.2.2.1 补体结合实验第12页
            1.2.2.2 间接荧光抗体实验第12页
            1.2.2.3 酶联免疫吸附试验第12-13页
        1.2.3 分子生物学诊断方法第13-14页
            1.2.3.1 基因探针技术第13页
            1.2.3.2 反向线性印记杂交技术第13页
            1.2.3.3 PCR检测技术第13-14页
    1.3 环形泰勒虫主要膜蛋白研究进展第14-15页
        1.3.1 子孢子表面抗原第14页
        1.3.2 裂殖体表面抗原第14页
        1.3.3 裂殖子表面抗原第14页
        1.3.4 热休克蛋白第14-15页
    1.4 研究的目的及意义第15-16页
第二章 牛环形泰勒虫Ta SP重组蛋白的表达和反应原性分析第16-24页
    2.1 引言第16页
    2.2 材料第16-17页
        2.2.1 主要仪器第16页
        2.2.2 主要试剂第16页
        2.2.3 血清第16-17页
        2.2.4 表达重组Ta SP蛋白的菌液第17页
    2.3 方法第17-19页
        2.3.1 引物合成第17页
        2.3.2 菌液的复苏及培养第17页
        2.3.3 提取重组质粒第17-18页
        2.3.4 PCR检测第18页
        2.3.5 重组蛋白的诱导表达第18-19页
        2.3.6 表达产物的纯化第19页
        2.3.7 Western-Blot分析第19页
    2.4 结果第19-22页
        2.4.1 PCR扩增结果第19-20页
        2.4.2 测序结果分析第20页
        2.4.3 重组蛋白的表达和纯化第20-22页
        2.4.4 重组蛋白Western-Blot实验第22页
    2.5 讨论第22-24页
第三章 以Ta SP重组蛋白为抗原的间接ELISA诊断方法的建立第24-33页
    3.1 引言第24页
    3.2 材料第24-25页
        3.2.1 主要材料第24页
        3.2.2 主要试剂第24页
        3.2.3 抗原的制备第24页
        3.2.4 环形泰勒虫标准阴性血清制备第24-25页
        3.2.5 环形泰勒虫标准阳性血清的制备第25页
        3.2.6 其他血清第25页
    3.3 方法第25-27页
        3.3.1 间接ELISA试验程序第25页
        3.3.2 间接ELISA最佳反应条件的选择第25-27页
            3.3.2.1 抗原及血清最佳稀释浓度的确定第25-26页
            3.3.2.2 酶结合物最适工作浓度测定第26页
            3.3.2.3 封闭液的选择第26-27页
        3.3.3 特异性实验(交叉实验)第27页
        3.3.4 ELISA阳性阈值和敏感性及特异性的确定第27页
        3.3.5 重复性试验第27页
    3.4 结果第27-31页
        3.4.1 间接ELISA最佳反应条件的摸索第27-29页
            3.4.1.1 抗原最佳稀释倍数的测定第27-28页
            3.4.1.2 血清最佳稀释度的测定第28页
            3.4.1.3 酶结合物最佳工作浓度的确定第28-29页
            3.4.1.4 封闭液的选择第29页
        3.4.2 特异性实验(交叉实验)第29-30页
        3.4.3 ELISA阳性阈值和敏感性、特异性的确定第30页
        3.4.4 重复性试验第30-31页
    3.5 讨论第31-33页
第四章 全文结论第33-34页
参考文献第34-39页
Abstract第39-40页

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