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趋化因子类病毒受体的研究

中文摘要第1-9页
Abstract第9-12页
1 引言第12-34页
   ·SARS 冠状病毒(SARS-COV)简介第12-24页
   ·趋化因子的研究进展第24-32页
   ·哺乳动物细胞表达系统简介第32-34页
2 材料和方法第34-53页
   ·试验材料第34-37页
     ·菌株细胞第34页
     ·载体第34页
     ·主要试剂及试剂盒第34页
     ·主要仪器第34-35页
     ·试验所用溶液及其配制第35-37页
   ·试验方法第37-53页
     ·真核表达载体pEGFP-N1/SARS-COVN 的构建第37-44页
     ·真核表达载体pdsRed2-N1/CXCL16 的构建第44页
     ·真核表达载体pcDNA3.1HisA/SARS-COVN-GFP 的构建第44页
     ·组织RNA 的提取第44-45页
     ·CXCL12 基因的RT-PCR 扩增第45-46页
     ·CXCR4 基因基因的扩增第46页
     ·GP5 基因片段的扩增第46页
     ·pcDNA3.1-CXCL12 重组质粒的构建与鉴定第46页
     ·重组质粒pcDNA3.1-CXCR4 的构建第46-47页
     ·重组质粒pEGFP-N1- GP5 的构建第47页
     ·真核表达载体pcDNA3.1HisA/SARS-COVN-GFP的转染及SARS-COVN-GFP 融合蛋白的表达纯化第47-49页
     ·表达产物的亚细胞定位检测第49-50页
     ·重组质粒pcDNA3.1-CXCR4、pcDNA3.1-CXCL12 和pEGFP-N1-GP5 转染293FT 细胞第50页
     ·IFA 检测猪CXCR4 和CXCL12 的瞬时表达第50-51页
     ·GP5 在细胞外与表达的CXCR4 结合的实验第51页
     ·CXCL12 融合蛋白的表达纯化及Westernblot 鉴定第51页
     ·微孔隔离小室( Transwell)检测表达的重组CXCL12 蛋白的趋化活性第51-52页
     ·微孔隔离小室( Transwell)检测表达的CXCL12 蛋白对不同种属的单个核细胞的趋化能力第52-53页
3 结果第53-66页
   ·基因的扩增第53-56页
     ·CXCL16、SARS-COVN、SARS-COVN-GFP 基因的扩增第53-54页
     ·CXCR4 基因的RT-PCR 扩增第54页
     ·CXCL12 基因的RT-PCR 扩增第54-55页
     ·GP5 基因的扩增第55-56页
   ·重组质粒的构建和酶切鉴定第56-58页
     ·pEGFP-N1/SARS-COVN、pdsRed2-N1/CXCL16、pcDNA3.1HisA-/SARS-COVN-GFP 的构建和鉴定第56-57页
     ·重组质粒pcDNA3.1-CXCR4 和pcDNA3.1-CXCL12 的构建与鉴定第57页
     ·重组质粒pEGFP-N1- GP5 的构建第57-58页
   ·SARS-COVN-GFP 融合蛋白的检测第58页
   ·CXCL16 和SARS-COVN 在293FT 细胞中存在共定位第58-60页
   ·SARS-COVN 在细胞外与表达的CXCL16 结合与定位第60-61页
   ·重组质粒pcDNA3.1-CXCR4 瞬时表达的IFA 检测第61-62页
   ·重组质粒pEGFP-N1- GP5 的瞬时表达第62页
   ·GP5 在细胞外与表达的CXCR4 结合的实验第62-63页
   ·重组质粒pcDNA3.1-CXCL12 瞬时表达的IFA 检测第63-64页
   ·纯化的CXCL12 融合蛋白的Westernblot检测第64页
   ·重组CXCL12 蛋白趋化活性的检测第64-66页
4 讨论第66-69页
   ·CXCL16 与SARS-CoV N 蛋白在细胞内外相互作用的研究第66-67页
   ·CXCL12 和CXCR4 的真核表达第67-69页
5 结论第69-70页
参考文献第70-79页
致谢第79-80页
个人简介第80页
攻读硕士学位期间发表论文第80页

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