| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 插图及附表清单 | 第11-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-18页 |
| 1.1 衰老与肿瘤发生 | 第13-18页 |
| 1.1.1 细胞衰老与肿瘤发生的关系 | 第13-14页 |
| 1.1.2 ALT肿瘤 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肿瘤发生中抑癌基因p53与原癌基因Ras的协同作用 | 第15-16页 |
| 1.1.4 抑癌基因p53在ALT肿瘤发生中的作用及MET转化 | 第16-17页 |
| 1.1.5 KrasG12D小鼠模型 | 第17-18页 |
| 1.2 本研究的主要内容及意义 | 第18页 |
| 第二章 癌基因KrasG12D的活化对ALT肿瘤发生及肿瘤类型的调控机理 | 第18-59页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-49页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19-26页 |
| 2.1.2 构建重组pAcGFP1-N1-Kras表达载体 | 第26-33页 |
| 2.1.3 定点突变pAcGFP1-N1-KrasG12D表达载体 | 第33-36页 |
| 2.1.3.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.1.3.2 定点突变PCR | 第34-35页 |
| 2.1.3.3 大提pAcGFP1-N1-KrasG12D质粒 | 第35-36页 |
| 2.1.4 细胞培养 | 第36-38页 |
| 2.1.5 pAcGFP1-N1-KrasG12D转染及G418筛选 | 第38-41页 |
| 2.1.6 蛋白免疫印迹技术(Western blot) | 第41-45页 |
| 2.1.7 实时荧光定量PCR | 第45-47页 |
| 2.1.8 衰老相关的β半乳糖苷酶染色 | 第47-48页 |
| 2.1.9 Ki67染色 | 第48-49页 |
| 2.1.10 细胞成克隆试验 | 第49页 |
| 2.2 结果与分析 | 第49-57页 |
| 2.2.1 成功构建pAcGFP1-N1-Kras表达载体 | 第49-52页 |
| 2.2.2 成功构建pAcGFP1-N1-KrasG12D表达载体 | 第52-53页 |
| 2.2.3 KrasG12D诱导mTR~(-/-)(G3)MEF细胞及WT-MEF细胞发生衰老 | 第53-55页 |
| 2.2.4 KrasG12D突变诱导SCID66 6B-1+p21siRNA细胞增殖能力增强且不发生MET现象 | 第55-57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文目录 | 第66-72页 |
