| 目录 | 第4-7页 |
| TABLE OF CONTENT | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 TGF-β信号通路简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 TGF-β的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 TGF-β信号通路的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 Smads蛋白超家族 | 第13-15页 |
| 1.2 TGF-β信号通路的调控 | 第15-19页 |
| 1.2.1 TGF-β信号通路受体的调控 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Smads复合体的入核 | 第16页 |
| 1.2.3 Smads调控目的基因的表达 | 第16-17页 |
| 1.2.4 Smads活性的调控 | 第17-19页 |
| 1.3 TGF-β信号通路在肿瘤中的作用 | 第19-23页 |
| 1.3.1 调控细胞的生长与增殖 | 第19页 |
| 1.3.2 调控细胞的侵袭与转移 | 第19-20页 |
| 1.3.3 调控细胞的分裂潜能 | 第20页 |
| 1.3.4 调控细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.3.5 诱导血管生成 | 第21页 |
| 1.3.6 屏蔽免疫系统监控 | 第21-22页 |
| 1.3.7 调控染色体稳定性 | 第22-23页 |
| 1.4 TGF-β信号通路和乳腺癌 | 第23-24页 |
| 1.5 Ovol2简介 | 第24-27页 |
| 1.5.1 Ovo基因家族 | 第24-25页 |
| 1.5.2 Ovol2的结构与功能 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-55页 |
| 2.1 常用药品和试剂 | 第27页 |
| 2.2 分子克隆相关实验 | 第27-38页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 质粒DNA的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 质粒DNA小量抽提 | 第29-30页 |
| 2.2.4 质粒DNA中量抽提 | 第30-31页 |
| 2.2.5 DNA样品琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.2.6 琼脂糖胶回收DNA片段 | 第31-32页 |
| 2.2.7 细胞基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.8 PGEX-4T-3-SMAD4及其截短型原核表达质粒的构建 | 第33-36页 |
| 2.2.9 SMAD4启动子荧光素酶报告质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.10 SMAD4启动子突变型荧光素酶报告质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.3 细胞相关实验 | 第38-42页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第38页 |
| 2.3.2 细胞传代 | 第38-39页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第39页 |
| 2.3.4 PEI转染法 | 第39-40页 |
| 2.3.5 TurboFect试剂悬浮细胞转染 | 第40-41页 |
| 2.3.6 Lipofectamine 2000转染试剂转染 | 第41页 |
| 2.3.7 慢病毒的包装与感染 | 第41-42页 |
| 2.4 RNA相关实验 | 第42-44页 |
| 2.4.1 Trizol法提取RNA | 第42页 |
| 2.4.2 RNA的反转录 | 第42-43页 |
| 2.4.3 实时荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 2.5 蛋白质相关实验 | 第44-46页 |
| 2.5.1 细胞总蛋白提取 | 第44页 |
| 2.5.2 细胞核蛋白提取 | 第44-45页 |
| 2.5.3 蛋白质免疫印迹法 | 第45-46页 |
| 2.6 相关综合实验 | 第46-55页 |
| 2.6.1 免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| 2.6.2 荧光素酶检测 | 第47页 |
| 2.6.3 染色质免疫沉淀 | 第47-50页 |
| 2.6.4 凝胶迁移实验 | 第50-53页 |
| 2.6.5 GST-Pull Down | 第53-55页 |
| 第三章 实验结果 | 第55-73页 |
| 3.1 Ovol2能够在乳腺癌细胞中抑制TGF-β信号通路 | 第55-58页 |
| 3.1.1 Ovol2能够抑制smads依赖的TGF-β信号通路 | 第55-56页 |
| 3.1.2 Ovol2能够抑制TGF-β信号通路相关基因的表达 | 第56-58页 |
| 3.2 Ovol2能够直接抑制smad4的表达 | 第58-67页 |
| 3.2.1 Ovol2能够抑制smad4的表达 | 第58页 |
| 3.2.2 Ovol2能够抑制smad4启动子C的活性 | 第58-60页 |
| 3.2.3 Ovol2在启动子C上结合位点的探寻 | 第60-62页 |
| 3.2.4 Ovol2能够结合smad4启动子C上的位点5’-GGTAACGG-3’ | 第62-65页 |
| 3.2.5 Ovol2通过结合5'-GGTAACGG-3’来抑制smad4的启动子C | 第65-67页 |
| 3.3 ovol2能够抑制smad4与DNA探针的结合能力 | 第67-73页 |
| 3.3.1 在体外实验中ovol2与smad4有相互作用 | 第67-69页 |
| 3.3.2 Ovol2能够与smad4直接结合 | 第69-71页 |
| 3.3.3 Ovol2能够抑制smad4与DNA探针的结合能力 | 第71-73页 |
| 第四章 讨论 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 主要缩略语及其对照 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
