| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-14页 |
| 第二章 恙虫病东方体血清学法检测方法的建立和评估 | 第14-36页 |
| 第一节 安徽省恙虫病新疫源地流行株56 kD外膜蛋白基因扩增及序列分析 | 第14-24页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第15-16页 |
| 1.1.1 实验材料、菌株、质粒 | 第15页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第15-16页 |
| 1.2 实验方法 | 第16-19页 |
| 1.2.1 安徽三界地区恙螨感染东方体的分离 | 第16-17页 |
| 1.2.2 安徽合肥地区病人血样中恙虫病东方体的分离 | 第17-18页 |
| 1.2.4 结构蛋白基因序列的测定及分析 | 第18页 |
| 1.2.5 基因序列系统进化分析 | 第18-19页 |
| 1.2.6 各株型东方体56 kD蛋白序列检索及蛋白序列比对分析 | 第19页 |
| 1.2.7 恙虫病东方体56 kD截短蛋白序列抗原性及理化性分析 | 第19页 |
| 1.3 结果 | 第19-22页 |
| 1.3.1 脏器中恙虫东方体DNA鉴定 | 第19页 |
| 1.3.2 目的片段扩增 | 第19-20页 |
| 1.3.3 序列系统进化树分析 | 第20-21页 |
| 1.3.4 序列对比结果 | 第21页 |
| 1.3.5 序列抗原性与理化特性分析结果 | 第21-22页 |
| 1.4 讨论 | 第22-24页 |
| 第二节 安徽省恙虫病新疫源地流行株56 kD外膜蛋白基因克隆表达及免疫活性鉴定 | 第24-32页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1 重组表达载体pET28a-SJ56kD和pET28a-HF56kD的构建和鉴定 | 第26页 |
| 2.2.2 重组SJ56kD蛋白和HF56kD蛋白的表达和纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 免疫印迹分析 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 构建pET28a：：SJ56kD和pET28a：：HF56kD重组表达载体 | 第27-28页 |
| 2.3.2 获得高纯度的重组SJ56kD蛋白和HF56kD蛋白 | 第28-29页 |
| 2.3.3 免疫印迹分析 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三节 建立胶体金免疫层析法检测恙虫病东方体 | 第32-36页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第32页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 ELISA分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2 采用间接法研制胶体金免疫层析诊断试纸检测血样中的恙虫病特异性IgM和IgG | 第33页 |
| 3.2.3 CIA法的敏感性、特异性测定 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-35页 |
| 3.3.1 混合重组抗原有较强抗原性 | 第33-34页 |
| 3.3.2 检测血样中抗恙虫病东方体IgG和IgM | 第34页 |
| 3.3.3 胶体金免疫层析法敏感性、特异性测定 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 恙虫病东方体核酸检测方法的建立和评估 | 第36-53页 |
| 第一节 恙虫病东方体环介导恒温扩增可视化快检方法的建立 | 第36-45页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第36-37页 |
| 1.1.1 实验动物、菌株、质粒 | 第36-37页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第37页 |
| 1.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第37页 |
| 1.2.2 反应体系 | 第37页 |
| 1.2.3 最低检测限分析 | 第37-38页 |
| 1.2.4 敏感性试验 | 第38页 |
| 1.2.5 特异性验证 | 第38页 |
| 1.3 结果 | 第38-43页 |
| 1.3.1 引物序列 | 第38-39页 |
| 1.3.2 LAMP最佳引物筛选 | 第39-40页 |
| 1.3.3 最低检测限分析 | 第40-41页 |
| 1.3.4 敏感性分析 | 第41页 |
| 1.3.5 特异性分析 | 第41-43页 |
| 1.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第二节 建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体 | 第45-53页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第45页 |
| 2.1.1 实验动物、菌株、质粒 | 第45页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 2.2.1 引物序列 | 第45-46页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR反应体系与普通PCR体系 | 第46页 |
| 2.2.3 最低检测限分析及标准曲线构建 | 第46页 |
| 2.2.4 重复性试验 | 第46页 |
| 2.2.5 敏感性试验 | 第46页 |
| 2.2.6 特异性验证 | 第46-47页 |
| 2.2.7 定量PCR检测恙虫病东方体感染小鼠血、脾脏、肝脏、肾脏标本 | 第47页 |
| 2.3 结果 | 第47-51页 |
| 2.3.1 最低检测限分析 | 第47-48页 |
| 2.3.2 qPCR标准曲线的构建 | 第48页 |
| 2.3.3 qPCR试验的重复性 | 第48-49页 |
| 2.3.4 敏感性分析 | 第49-50页 |
| 2.3.5 特异性分析 | 第50-51页 |
| 2.3.6 定量PCR检测恙虫病东方体感染小鼠血、脾脏、肝脏、肾脏标本 | 第51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 全文小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 在校期间发表的文章及研究成果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
