| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号表 | 第7-8页 |
| 主要仪器 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 精原干细胞的起源及精子发生 | 第13-14页 |
| 1.2 精原干细胞的特征 | 第14-19页 |
| 1.2.1 精原干细胞的数量 | 第14页 |
| 1.2.2 精原干细胞的发育微环境 | 第14-15页 |
| 1.2.3 精原干细胞细胞周期 | 第15页 |
| 1.2.4 精原干细胞的迁移 | 第15-16页 |
| 1.2.5 精原干细胞的分子标记 | 第16页 |
| 1.2.6 调控精原干细胞的自我更新及分化的主要分子 | 第16-19页 |
| 1.2.6.1 GDNF | 第17页 |
| 1.2.6.2 Plzf | 第17页 |
| 1.2.6.3 Nanos | 第17-18页 |
| 1.2.6.4 LIF | 第18页 |
| 1.2.6.5 其他调控分子 | 第18-19页 |
| 1.3 精原干细胞的分离纯化方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 精原干细胞的分离方法 | 第19-20页 |
| 1.3.2 精原干细胞的冷冻保存 | 第20-21页 |
| 1.4 睾丸支持细胞及其对SSCs的作用 | 第21-22页 |
| 1.4.1 睾丸支持细胞形态结构特点 | 第21页 |
| 1.4.2 支持细胞的作用 | 第21-22页 |
| 1.5 精原干细胞多能性研究 | 第22页 |
| 1.6 精原干细胞体外分化机制 | 第22-23页 |
| 1.7 精原干细胞的移植 | 第23-24页 |
| 1.8 精原干细胞的应用前景 | 第24-26页 |
| 1.9 本实验研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 精原干细胞及支持细胞的分离培养与鉴定 | 第27-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第28页 |
| 1.2 主要实验器材 | 第28页 |
| 1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 1.4 实验方法 | 第28-33页 |
| 1.4.1 基础培养液 | 第28-29页 |
| 1.4.2 因子培养液 | 第29页 |
| 1.4.3 猪睾丸支持细胞饲养层的制备 | 第29页 |
| 1.4.4 猪睾丸支持细胞的传代 | 第29-30页 |
| 1.4.5 猪精原干细胞的分离 | 第30页 |
| 1.4.6 精原干细胞的培养 | 第30页 |
| 1.4.7 精原干细胞的传代培养 | 第30-31页 |
| 1.4.7.1 胰酶消化SSCs传代 | 第31页 |
| 1.4.7.2 挑克隆法SSCs传代 | 第31页 |
| 1.4.8 精原干细胞与支持细胞共培养 | 第31页 |
| 1.4.9 精原干细胞的鉴定 | 第31-32页 |
| 1.4.9.1 精原干细胞的形态学鉴定 | 第31-32页 |
| 1.4.9.2 精原干细胞AKP染色鉴定 | 第32页 |
| 1.4.9.3 精原干细胞间接免疫荧光鉴定 | 第32页 |
| 1.4.10 支持细胞的鉴定 | 第32页 |
| 1.4.10.1 支持细胞的形态学鉴定 | 第32页 |
| 1.4.10.2 支持细胞的油红O染色 | 第32页 |
| 1.4.11 精原干细胞的冻存与复苏 | 第32-33页 |
| 1.4.11.1 精原干细胞的冻存 | 第32-33页 |
| 1.4.11.2 精原干细胞的复苏 | 第33页 |
| 2 实验结果 | 第33-36页 |
| 2.1 精原干细胞的形态学观察 | 第33-34页 |
| 2.2 精原干细胞的AKP及免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 2.3 支持细胞的形态学观察 | 第35页 |
| 2.4 支持细胞的油红O染色 | 第35-36页 |
| 2.5 精原干细胞的传代培养 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 精原干细胞的诱导分化及鉴定 | 第38-50页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第39页 |
| 1.2 实验主要仪器 | 第39页 |
| 1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 1.4 实验方法 | 第39-44页 |
| 1.4.1 SSCs向神经元样细胞分化 | 第39-40页 |
| 1.4.2 SSCs向成骨细胞分化 | 第40-41页 |
| 1.4.3 SSCs向脂肪细胞分化 | 第41页 |
| 1.4.4 诱导结果的鉴定 | 第41-44页 |
| 1.4.4.1 甲苯胺蓝染色 | 第41-42页 |
| 1.4.4.2 ALP(NBT/BCIP法)染色 | 第42页 |
| 1.4.4.3 Von Kossa's法染色 | 第42页 |
| 1.4.4.4 油红O染色 | 第42页 |
| 1.4.4.5 诱导结果的免疫组化鉴定 | 第42页 |
| 1.4.4.6 qRT-PCR检测关键基因 | 第42-44页 |
| 2 实验结果 | 第44-47页 |
| 2.1 SSCs诱导体系的建立 | 第44-45页 |
| 2.1.1 SSCs向神经元样细胞诱导分化体系 | 第44页 |
| 2.1.2 SSCs向成骨细胞诱导分化体系 | 第44页 |
| 2.1.3 SSCs向脂肪细胞诱导分化体系 | 第44-45页 |
| 2.2 SSCs向神经元样细胞诱导分化形态变化过程及鉴定 | 第45页 |
| 2.3 SSCs向成骨细胞诱导分化形态变化过程及鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4 SSCs向脂肪细胞诱导分化形态变化过程及鉴定 | 第46-47页 |
| 2.5 qRT-PCR检测结果 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-50页 |
| 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第66-67页 |
