| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 迟缓爱德华菌的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 疾病特征和流行病学 | 第16-17页 |
| 1.1.2 病原学 | 第17-18页 |
| 1.1.3 迟缓爱德华菌病的防治 | 第18-20页 |
| 1.2 双组分系统 | 第20-21页 |
| 1.3 Ⅲ型分泌系统 | 第21页 |
| 1.4 鱼类免疫系统 | 第21-23页 |
| 1.4.1 鱼类免疫器官 | 第21-22页 |
| 1.4.2 鱼类免疫细胞 | 第22页 |
| 1.4.3 鱼类细胞因子 | 第22-23页 |
| 1.5 荧光定量技术 | 第23-25页 |
| 1.5.1 荧光定量技术的分类 | 第23-24页 |
| 1.5.2 实时荧光定量PCR(qPCR)的定量方法 | 第24-25页 |
| 1.5.3 荧光定量技术的应用和前景 | 第25页 |
| 1.6 本研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.5 实验所用溶液及其配制 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 菌种的活化及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.2 革兰氏染色步骤 | 第29页 |
| 2.2.3 迟缓爱德华菌16srRNA鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.3.1 引物的合成 | 第29页 |
| 2.2.3.2 细菌基因组DNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.3.3 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3.4 PCR产物纯化及测定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 基因缺失株的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第31页 |
| 2.2.4.2 缺失片段的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.4.3 重组自杀质粒的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.4.4 接合与单同源菌株的筛选 | 第33页 |
| 2.2.4.5 双交换突变株的筛选 | 第33页 |
| 2.2.5 生长曲线测定 | 第33页 |
| 2.2.6 斑马鱼半数致死量(LD50)测定 | 第33-34页 |
| 2.2.7 黏蛋白渗透试验 | 第34页 |
| 2.2.8 不同浓度岩藻糖对FusKR和T3SS基因表达的影响 | 第34-38页 |
| 2.2.8.1 不同浓度岩藻糖处理样品 | 第34页 |
| 2.2.8.2 细菌RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.8.3 反转录反应 | 第35-36页 |
| 2.2.8.4 荧光定量PCR检测FusKR和T3SS基因的相对表达量 | 第36-38页 |
| 2.2.9 30 mM/L岩藻糖下缺失株ΔfucP对FusKR和T3SS基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.2.9.1 30 mM/L岩藻糖下处理样品 | 第38页 |
| 2.2.9.2 细菌RNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.9.3 反转录反应 | 第38页 |
| 2.2.9.4 荧光定量PCR检测FusKR和T3SS基因的相对表达量 | 第38-39页 |
| 2.2.10 fucP基因缺失对罗非鱼定植和细胞因子分析的影响 | 第39-41页 |
| 2.2.10.1 动物组织样品采集 | 第39页 |
| 2.2.10.2 动物肠道细菌计数 | 第39页 |
| 2.2.10.3 动物组织RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.10.4 反转录反应 | 第40页 |
| 2.2.10.5 荧光定量PCR检测罗非鱼细胞因子基因的相对表达量 | 第40-41页 |
| 2.2.11 统计分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-54页 |
| 3.1 迟缓爱德华菌的培养和鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.2 ΔfucP缺失菌株的构建和鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.1 fucP缺失片段的构建 | 第43页 |
| 3.2.2 接合质粒pDMK-P的构建 | 第43页 |
| 3.2.3 单交换菌株的筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.4 双交换突变株的筛选 | 第44页 |
| 3.3 生长特性比较结果 | 第44-45页 |
| 3.4 半数致死量的测定结果 | 第45页 |
| 3.5 fucP基因的缺失对黏蛋白运动的影响 | 第45-46页 |
| 3.6 L-岩藻糖调控的FusKR和T3SS基因 | 第46-48页 |
| 3.7 fucP基因突变体调控的FusKR和T3SS基因的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.8 fucP基因突变体表现出减少粘附和定植E.tarda | 第49-50页 |
| 3.9 fucP基因突变体改变了罗非鱼细胞因子基因的表达 | 第50-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-66页 |
| 7 致谢 | 第66-67页 |
| 8 研究生期间发表的论文 | 第67页 |
