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孔雀石绿降解菌的分离鉴定、生物学特性研究及三苯甲烷还原酶基因的克隆和表达

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
符号与缩略语说明第11-12页
前言第12-13页
第一章 文献综述第13-27页
    第一节 三苯甲烷类染料及孔雀石绿简介第13-18页
        1 三苯甲烷类染料概述第13-14页
        2 三苯甲烷类染料污染及危害第14-15页
        3 孔雀石绿的结构、性质及用途第15-16页
        4 孔雀石绿的危害第16-17页
        5 孔雀石绿及关联产物的检测第17-18页
            5.1 分光光度法第17页
            5.2 高效液相色谱法第17-18页
            5.3 高效液相色谱-质谱法第18页
    第二节 三苯甲烷类染料及孔雀石绿的降解研究进展第18-22页
        1 吸附法第18-19页
        2 光催化氧化第19-20页
        3 生物法第20-21页
            3.1 具有降解脱色能力的真菌第20页
            3.2 具有降解脱色能力的细菌第20-21页
            3.3 降解脱色混合菌第21页
        4 微生物降解三苯甲烷类染料的展望第21-22页
    参考文献第22-27页
第二章 孔雀石绿降解菌的分离、鉴定及其降解特性研究第27-49页
    第一节 孔雀石绿降解菌株K4-W和K9的分离与鉴定第27-41页
        1 材料与方法第27-29页
            1.1 培养基与试剂第27页
            1.2 孔雀石绿降解菌的分离第27-28页
            1.3 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定第28页
            1.4 降解菌株16S rRNA基因序列的测定第28-29页
            1.5 降解菌株系统发育地位的确定第29页
            1.6 菌体生长量的测定第29页
            1.7 孔雀石绿的含量测定第29页
        2 结果与讨论第29-40页
            2.1 孔雀石绿降解菌株的分离第29-30页
            2.2 降解菌株K4-W和K9的菌落形态及生理生化特征第30-31页
            2.3 菌株K4-W和K9的16S rRNA基因扩增第31-32页
            2.4 降解菌株K4-W和K9的鉴定结果第32-34页
            2.5 环境条件对降解菌株K4-W和K9生长的影响第34-39页
            2.6 菌株K4-W和K9对抗生素的耐受性第39-40页
        3 小结第40-41页
    第二节 孔雀石绿降解菌株K4-W和K9的降解特性研究第41-47页
        1 材料与方法第41页
            1.1 培养基与试剂第41页
            1.2 菌体生长量的测定第41页
            1.3 孔雀石绿及其他染料的含量测定第41页
            1.4 种子液培养第41页
        2 结果与讨论第41-47页
            2.1 菌株K4-W和K9的生长和孔雀石绿降解的关系第41-42页
            2.2 孔雀石绿起始浓度对K4-W和K9降解孔雀石绿的影响第42-43页
            2.3 温度对K4-W和K9降解孔雀石绿的影响第43-44页
            2.4 接种量对K4-W和K9降解孔雀石绿的影响第44-45页
            2.5 金属离子对K4.W和K9降解孔雀石绿的影响第45-46页
            2.6 K4-W和K9对不同染料的降解情况第46-47页
        3 小结第47页
    参考文献第47-49页
第三章 三苯甲烷还原酶基因(tmr2)的克隆及表达第49-63页
    1 材料和方法第49-54页
        1.1 培养基与试剂第49页
        1.2 菌株与质粒第49-50页
        1.3 菌体基因组DNA的提取第50页
        1.4 质粒DNA的小量提取第50-51页
        1.5 普通感受态细胞的制备(CaCl_2法)第51页
        1.6 三苯甲烷还原酶基因的引物设计和PCR扩增第51-52页
        1.7 PCR产物的纯化及酶切第52页
        1.8 表达载体pET29a的制备第52页
        1.9 酶连及酶连产物的转化第52-53页
        1.10 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析第53页
        1.11 酶活分析第53-54页
    2 结果与讨论第54-60页
        2.1 PCR法克隆三苯甲烷还原酶基因第54-55页
        2.2 序列测定与比较分析第55页
        2.3 tmr2基因在E.coli BL21(DE3)中的表达第55-60页
    3 小结第60页
    参考文献第60-63页
第四章 三苯甲烷还原酶基因(tmr2)的侧翼序列扩增及分析第63-69页
    1 材料与方法第63-65页
        1.1 培养基与试剂第63页
        1.2 菌株与质粒第63页
        1.3 菌体基因组DNA和质粒DNA的提取第63-64页
        1.4 侧翼序列SEFA-PCR引物设计和PCR扩增第64-65页
        1.5 PCR产物的TA克隆第65页
        1.6 序列分析第65页
    2 结果与讨论第65-66页
        2.1 tmr2基因侧翼序列的扩增及分析第65-66页
    3 小结第66-67页
    参考文献第67-69页
全文总结第69-71页
附录一 文中所用培养基及试剂配方第71-73页
附录二 相关DNA序列第73-79页
攻读硕士学位期间发表或已接收的论文第79-81页
致谢第81页

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