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黑木耳漆酶基因的克隆与表达

致谢第4-8页
摘要第8-9页
1 文献综述第9-27页
    1.1 漆酶的研究现状第9-21页
        1.1.1 漆酶及其结构特征第9-11页
        1.1.2 漆酶的理化性质第11-13页
        1.1.3 漆酶的催化氧化机理第13-15页
        1.1.4 漆酶的应用第15-19页
        1.1.5 漆酶的分子生物学研究进展第19-21页
    1.2 外源基因的表达系统第21-25页
        1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达系统第21-23页
        1.2.2 宿主菌和载体第23-25页
    1.3 影响外源蛋白表达的因素第25-26页
        1.3.1 密码子第25页
        1.3.2 外源基因本身的特点第25页
        1.3.3 启动子第25页
        1.3.4 与酵母细胞基因组整合的拷贝数第25页
        1.3.5 信号肽第25-26页
    1.4 巴斯德毕赤酵母表达系统应用前景第26-27页
2 引言第27-28页
3 材料与方法第28-39页
    3.1 材料第28-29页
        3.1.1 菌株和质粒第28页
        3.1.2 试剂与药品第28页
        3.1.3 仪器和设备第28页
        3.1.4 培养基第28-29页
        3.1.5 引物第29页
    3.2 实验方案第29-31页
        3.2.1 黑木耳漆酶高产菌株的筛选第29页
        3.2.2 黑木耳地茂一号漆酶基因的克隆第29-30页
        3.2.3 黑木耳漆酶基因的真核表达第30-31页
    3.3 方法第31-39页
        3.3.1 黑木耳漆酶的活力测定第31页
        3.3.2 黑木耳总RNA 的提取第31-32页
        3.3.3 RT-PCR 克隆黑木耳漆酶的 cDNA第32-33页
        3.3.4 黑木耳总 DNA 的提取第33-34页
        3.3.5 PCR 克隆黑木耳漆酶的gDNA第34页
        3.3.6 PCR 核酸产物的纯化第34页
        3.3.7 质粒的提取第34-35页
        3.3.8 酶切体系第35页
        3.3.9 重组载体的构建第35-36页
        3.3.10 感受态细胞的制备第36-37页
        3.3.11 转化第37页
        3.3.12 重组载体的鉴定第37页
        3.3.13 漆酶的异源诱导表达第37页
        3.3.14 黑木耳漆酶信号肽的分析第37-38页
        3.3.15 漆酶的二级结构预测第38页
        3.3.16 漆酶酶学性质分析第38-39页
4 结果与分析第39-54页
    4.1 筛选结果第39页
    4.2 黑木耳漆酶基因的克隆第39-46页
        4.2.1 黑木耳总RNA 的提取第39页
        4.2.2 RT-PCR 扩增cDNA 基因第39-40页
        4.2.3 cDNA 基因的TA 克隆及测序结果第40-42页
        4.2.4 黑木耳总DNA 的提取第42-43页
        4.2.5 gDNA 的 PCR 扩增第43-46页
    4.3 黑木耳漆酶信号肽的预测第46-47页
    4.4 漆酶二级结构预测第47-49页
    4.5 黑木耳漆酶的真核表达第49-54页
        4.5.1 pPIC9K-cDNA 重组载体的构建第49页
        4.5.2 pPIC9K-cDNA 线性化后转化毕赤酵母 GS115第49-50页
        4.5.3 重组漆酶的诱导表达第50-51页
        4.5.4 漆酶的酶学性质分析第51-54页
5 结论与讨论第54-56页
    5.1 结论第54页
    5.2 讨论第54-56页
参考文献第56-62页
ABSTRACT第62-63页

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