| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-27页 |
| 1.1 漆酶的研究现状 | 第9-21页 |
| 1.1.1 漆酶及其结构特征 | 第9-11页 |
| 1.1.2 漆酶的理化性质 | 第11-13页 |
| 1.1.3 漆酶的催化氧化机理 | 第13-15页 |
| 1.1.4 漆酶的应用 | 第15-19页 |
| 1.1.5 漆酶的分子生物学研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2 外源基因的表达系统 | 第21-25页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第21-23页 |
| 1.2.2 宿主菌和载体 | 第23-25页 |
| 1.3 影响外源蛋白表达的因素 | 第25-26页 |
| 1.3.1 密码子 | 第25页 |
| 1.3.2 外源基因本身的特点 | 第25页 |
| 1.3.3 启动子 | 第25页 |
| 1.3.4 与酵母细胞基因组整合的拷贝数 | 第25页 |
| 1.3.5 信号肽 | 第25-26页 |
| 1.4 巴斯德毕赤酵母表达系统应用前景 | 第26-27页 |
| 2 引言 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-39页 |
| 3.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第28页 |
| 3.1.3 仪器和设备 | 第28页 |
| 3.1.4 培养基 | 第28-29页 |
| 3.1.5 引物 | 第29页 |
| 3.2 实验方案 | 第29-31页 |
| 3.2.1 黑木耳漆酶高产菌株的筛选 | 第29页 |
| 3.2.2 黑木耳地茂一号漆酶基因的克隆 | 第29-30页 |
| 3.2.3 黑木耳漆酶基因的真核表达 | 第30-31页 |
| 3.3 方法 | 第31-39页 |
| 3.3.1 黑木耳漆酶的活力测定 | 第31页 |
| 3.3.2 黑木耳总RNA 的提取 | 第31-32页 |
| 3.3.3 RT-PCR 克隆黑木耳漆酶的 cDNA | 第32-33页 |
| 3.3.4 黑木耳总 DNA 的提取 | 第33-34页 |
| 3.3.5 PCR 克隆黑木耳漆酶的gDNA | 第34页 |
| 3.3.6 PCR 核酸产物的纯化 | 第34页 |
| 3.3.7 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 3.3.8 酶切体系 | 第35页 |
| 3.3.9 重组载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.10 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 3.3.11 转化 | 第37页 |
| 3.3.12 重组载体的鉴定 | 第37页 |
| 3.3.13 漆酶的异源诱导表达 | 第37页 |
| 3.3.14 黑木耳漆酶信号肽的分析 | 第37-38页 |
| 3.3.15 漆酶的二级结构预测 | 第38页 |
| 3.3.16 漆酶酶学性质分析 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-54页 |
| 4.1 筛选结果 | 第39页 |
| 4.2 黑木耳漆酶基因的克隆 | 第39-46页 |
| 4.2.1 黑木耳总RNA 的提取 | 第39页 |
| 4.2.2 RT-PCR 扩增cDNA 基因 | 第39-40页 |
| 4.2.3 cDNA 基因的TA 克隆及测序结果 | 第40-42页 |
| 4.2.4 黑木耳总DNA 的提取 | 第42-43页 |
| 4.2.5 gDNA 的 PCR 扩增 | 第43-46页 |
| 4.3 黑木耳漆酶信号肽的预测 | 第46-47页 |
| 4.4 漆酶二级结构预测 | 第47-49页 |
| 4.5 黑木耳漆酶的真核表达 | 第49-54页 |
| 4.5.1 pPIC9K-cDNA 重组载体的构建 | 第49页 |
| 4.5.2 pPIC9K-cDNA 线性化后转化毕赤酵母 GS115 | 第49-50页 |
| 4.5.3 重组漆酶的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.5.4 漆酶的酶学性质分析 | 第51-54页 |
| 5 结论与讨论 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54页 |
| 5.2 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| ABSTRACT | 第62-63页 |
