摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第11-21页 |
1.1 SUMO 化修饰研究进展 | 第11-14页 |
1.1.1 SUMO 蛋白家族 | 第11-12页 |
1.1.2 SUMO 化修饰的底物 | 第12-13页 |
1.1.3 SUMO 化修饰过程 | 第13-14页 |
1.2 SUMO 的生物学功能 | 第14-17页 |
1.2.1 参与转录调控 | 第15-16页 |
1.2.2 SUMO 与肿瘤的关系 | 第16-17页 |
1.3 TAF41 的研究概述 | 第17-19页 |
1.3.1 TAF41 的发现及功能初探 | 第17-18页 |
1.3.2 TAF41 的基因及编码蛋白信息 | 第18页 |
1.3.3 TAF41 在肿瘤发生中的潜在作用 | 第18-19页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
第二章 材料与方法 | 第21-30页 |
2.1 材料 | 第21-24页 |
2.1.1 材料及购买试剂 | 第21-22页 |
2.1.2 配制试剂 | 第22-24页 |
2.2 主要仪器 | 第24-25页 |
2.3 实验方法 | 第25-30页 |
2.3.1 技术路线 | 第25页 |
2.3.2 引物的设计 | 第25页 |
2.3.3 人TAF41 基因真核表达载体的构建 | 第25-26页 |
2.3.4 抽提重组质粒pCMV-HA/Myc-TAF41 | 第26页 |
2.3.5 重组质粒pCMV-HA/Myc-TAF41 酶切鉴定 | 第26页 |
2.3.6 质粒pCMV-HA/Myc-TAF41 突变体的构建 | 第26-27页 |
2.3.7 细胞相关实验技术 | 第27页 |
2.3.8 免疫荧光观察SUMO-1 与TAF41 及其突变体的共定位 | 第27-28页 |
2.3.9 免疫共沉淀Pulldown 与TAF41 结合的蛋白 | 第28-29页 |
2.3.10 Western Blot 检测TAF41 的SUMO 修饰及其修饰位点 | 第29-30页 |
第三章 结果与分析 | 第30-35页 |
3.1 人TAF41 真核表达载体的构建和鉴定 | 第30-32页 |
3.1.1 TAF41 基因片段的扩增 | 第30页 |
3.1.2 重组质粒pCMV-Myc/HA- TAF41 的构建和鉴定 | 第30-32页 |
3.2 pCMV-Myc/HA- TAF41 突变体的构建 | 第32页 |
3.2.1 分析TAF41 氨基酸序列中的SUMO 化位点 | 第32页 |
3.2.2 K42R、K168R 及K42/168R 突变体构建及鉴定 | 第32页 |
3.3 TAF41 及其突变体和SUMO-1 在细胞内共定位的研究 | 第32-34页 |
3.4 免疫共沉淀证实TAF41 蛋白的SUMO 化修饰及修饰位点 | 第34-35页 |
第四章 讨论 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-41页 |
附录 | 第41-46页 |
致谢 | 第46-47页 |
作者简介 | 第47页 |