首页--医药、卫生论文--神经病学与精神病学论文--脑部疾病论文--大脑发育异常论文

转甲状腺素蛋白Val30Ala突变致家族型淀粉样多神经病的作用机制研究

摘要第4-7页
Abstract第7-11页
英文缩略词表第12-17页
第一章 前言第17-31页
    1.1 家族型淀粉样多神经病第17页
    1.2 TTR 基因点突变是导致 FAP 的主要原因第17-21页
    1.3 基因突变导致 TTR 蛋白稳定性下降形成低聚物和淀粉样纤维第21-24页
    1.4 TTR 蛋白低聚物和淀粉样沉积引发细胞毒性第24-26页
    1.5 FAP 疾病的治疗第26页
    1.6 论文设计依据和研究思路第26-30页
    1.7 技术路线第30-31页
第二章 转甲状腺素蛋白野生型、V30A、V30M 突变体的体外表达与纯化第31-55页
    2.1 实验材料和仪器第33-40页
        2.1.1 材料第33页
        2.1.2 试剂第33-34页
        2.1.3 溶液配制第34-39页
        2.1.4 仪器第39-40页
    2.2 实验方法第40-50页
        2.2.1 TTR 基因的合成第40页
        2.2.2 pQE30-野生型 TTR 质粒构建第40-43页
        2.2.3 pQE30-TTR V30M 和 pQE30-TTR V30A 质粒构建第43-46页
        2.2.4 转化 pQE30-TTRs 质粒到 M15[pREP4]菌中第46页
        2.2.5 TTRs 蛋白的表达第46-48页
        2.2.6 TTRs 蛋白的 Ni 柱纯化第48-49页
        2.2.7 TTRs 蛋白的透析和冻干第49-50页
    2.3 实验结果第50-53页
        2.3.1 PGE-TTR 和 pQE30 空载体质粒双酶切第50-51页
        2.3.2 构建 PGE-TTR V30A 和 PGE-TTR V30M 质粒第51页
        2.3.3 IPTG 诱导 TTRs 蛋白表达第51-52页
        2.3.4 TTRs 蛋白的可溶性检测第52-53页
        2.3.5 TTRs 蛋白的镍柱纯化第53页
    2.4 讨论第53-54页
    2.5 小结第54-55页
第三章 转甲状腺素蛋白野生型、V30A、V30M 突变体体外稳定性研究第55-77页
    3.1 实验材料和仪器第56-57页
        3.1.1 实验材料第56页
        3.1.2 试剂第56页
        3.1.3 溶液配制第56-57页
        3.1.4 仪器第57页
    3.2 实验方法第57-61页
        3.2.1 OD400nm 光密度分析第57-58页
        3.2.2 ThT 荧光检测法第58页
        3.2.4 等温微量热滴定法第58页
        3.2.5 SDS-PAGE 电泳第58-59页
        3.2.6 白藜芦醇结合分析第59页
        3.2.7 色氨酸荧光检测第59-60页
        3.2.8 圆二色谱法第60页
        3.2.9 分子动力学模拟第60-61页
        3.2.10 统计学分析第61页
    3.3 实验结果第61-74页
        3.3.1 V30A 突变对 TTR 淀粉样纤维形成的影响第61-64页
        3.3.2 T_4和 Flu 对 TTR 野生型和 V30A、V30M 突变体形成淀粉样沉淀的影响第64-66页
        3.3.3 用等温微量热滴定法检测 Flu 与 TTRs 的结合力第66-67页
        3.3.4 V30A 突变对 TTR 四级结构稳定性的影响第67-70页
        3.3.5 V30A 突变对 TTR 三级结构稳定性的影响第70-71页
        3.3.6 V30A 突变对 TTR 二级结构稳定性的影响第71-73页
        3.3.7 TTR 野生型和 V30A,V30M 突变体的分子动力学模拟第73-74页
    3.4 讨论第74-76页
    3.5 小结第76页
    3.6 工作展望第76-77页
第四章 转甲状腺素蛋白野生型、V30A、V30M 突变体的细胞毒作用及其作用机制第77-97页
    4.1 实验材料和仪器第78-82页
        4.1.1 实验材料第78页
        4.1.2 试剂第78-79页
        4.1.3 溶液配制第79-81页
        4.1.4 仪器第81-82页
    4.2 实验方法第82-85页
        4.2.1 IMR-32 细胞培养第82页
        4.2.2 MTT 法第82页
        4.2.3 台盼蓝染色法第82页
        4.2.4 活性氧水平检测第82-83页
        4.2.5 免疫蛋白印迹第83-84页
        4.2.6 透射电镜第84页
        4.2.7 统计学分析第84-85页
    4.3 实验结果第85-94页
        4.3.1 TTRs 蛋白致 IMR-32 细胞毒性第85-87页
        4.3.2 TTRs 蛋白对细胞内活性氧水平的影响第87-88页
        4.3.3 TTRs 对细胞内 DNA 损伤蛋白表达水平的影响第88-89页
        4.3.4 TTRs 对细胞内凋亡相关蛋白的影响第89-91页
        4.3.5 TTRs 对细胞内自噬相关蛋白的影响第91-92页
        4.3.6 TTRs 对热休克蛋白 HSP70 的影响第92-93页
        4.3.7 V30A 突变体透射电镜形态观察第93-94页
    4.4 讨论第94-95页
    4.5 小结第95-96页
    4.6 工作展望第96-97页
结论第97-99页
参考文献第99-114页
攻读博士学位期间发表的文章及参加学术活动第114-115页
致谢第115-116页

论文共116页,点击 下载论文
上一篇:胸腺基质淋巴细胞生成素在口腔鳞癌中的表达及意义
下一篇:microRNA-221在骨肉瘤中作用及机制的研究