中文摘要 | 第4-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
缩略语 | 第15-16页 |
前言 | 第16-18页 |
对象与方法 | 第18-33页 |
1.1 实验对象 | 第18-20页 |
1.1.1 细胞系 | 第18页 |
1.1.2 相关试剂及耗材 | 第18-20页 |
1.1.3 主要仪器 | 第20页 |
1.2 实验方法 | 第20-22页 |
1.2.1 细胞培养 | 第20页 |
1.2.2 药物配置 | 第20-22页 |
1.3 RT-PCR检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78 mRNA表达 | 第22-25页 |
1.3.1 细胞总RNA提取 | 第22页 |
1.3.2 紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度 | 第22-23页 |
1.3.3 RNA逆转录合成cDNA | 第23页 |
1.3.4 PCR | 第23-24页 |
1.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
1.3.6 结果分析 | 第25页 |
1.4 Western Blot法检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78蛋白表达 | 第25-28页 |
1.4.1 细胞总蛋白的提取 | 第25页 |
1.4.2 蛋白总浓度测定 | 第25-26页 |
1.4.3 蛋白质变性 | 第26页 |
1.4.4 SDS-PAGE电泳、电转移、封闭 | 第26-28页 |
1.4.5 蛋白质的免疫检测 | 第28页 |
1.4.6 辣根过氧化物酶(ECL)法显影 | 第28页 |
1.4.7 结果判定 | 第28页 |
1.5 RT-PCR检测SKOV3、SKOV3/DDP细胞中GRP78、PI3K、AKT mRNA表达 | 第28-29页 |
1.5.1 实验分组及处理 | 第28-29页 |
1.5.2 细胞总RNA的提取及RT-PCR步骤及结果处理 | 第29页 |
1.6 Western Blot法检测SKOV3、SKOV3/DDP细胞GRP78、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达 | 第29页 |
1.6.1. 实验分组及处理 | 第29页 |
1.6.2. 细胞总蛋白的提取及Western blot实验步骤及结果处理 | 第29页 |
1.7 MTT法测定顺铂、A23187及BAPTA-AM联合顺铂对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长的影响 | 第29-31页 |
1.7.1 细胞培养及分组加药 | 第30页 |
1.7.2 顺铂对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长抑制作用 | 第30页 |
1.7.3 A23187联合顺铂及BAPTA-AM联合顺铂对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长的影响 | 第30-31页 |
1.8 流式细胞术检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡 | 第31-32页 |
1.8.1 原理 | 第31页 |
1.8.2 步骤 | 第31-32页 |
1.9. 流式细胞术检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞周期 | 第32页 |
1.9.1 步骤 | 第32页 |
1.10 统计学方法 | 第32-33页 |
结果 | 第33-42页 |
2.1 SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78 mRNA表达 | 第33页 |
2.2 SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78蛋白表达 | 第33-34页 |
2.3 BAPTA-AM、A23187对SKOV3和SKOV3/DDP细胞GRP78表达水平的影响 | 第34-35页 |
2.4 BAPTA-AM、A23187对SKOV3和SKOV3/DDP细胞DDP敏感性的影响 | 第35-36页 |
2.5 GRP78对SKOV3及SKOV3/DDP细胞PI3K、AKT mRNA表达的影响 | 第36-37页 |
2.6 GRP78对SKOV3及SKOV3/DDP细胞PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响 | 第37-39页 |
2.7 流式细胞术检测GRP78对SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡影响 | 第39-40页 |
2.8 GRP78对SKOV3和SKOV3/DDP细胞周期的影响 | 第40-42页 |
讨论 | 第42-49页 |
3.1 内质网应激与GRP78在肿瘤发生中的作用 | 第42-44页 |
3.1.1 内质网应激 | 第42页 |
3.1.2 GRP78的结构与功能 | 第42-43页 |
3.1.3 内质网应激与GRP78在肿瘤发生中的作用 | 第43-44页 |
3.2 GRP78在卵巢癌中的表达及其对顺铂敏感性的影响 | 第44-45页 |
3.3 GRP78影响卵巢癌顺铂敏感性的作用机制 | 第45-49页 |
3.3.1 GRP78对卵巢癌细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响 | 第45-46页 |
3.3.2 GRP78对卵巢癌细胞凋亡与细胞周期的影响 | 第46-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第56-57页 |
综述 | 第57-65页 |
综述参考文献 | 第62-65页 |
致谢 | 第65页 |