| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一章 LRF与内质网应激研究进展 | 第15-26页 |
| 1.1 LRF的发现 | 第15页 |
| 1.2 LRF的结构 | 第15页 |
| 1.3 LRF的表达 | 第15-16页 |
| 1.4 LRF的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.4.1 LRF与Luman | 第16-18页 |
| 1.4.2 LRF与糖皮质激素受体调节 | 第18-19页 |
| 1.5 内质网应激 | 第19-24页 |
| 1.5.1 ATF6信号通路 | 第23页 |
| 1.5.2 PERK介导的信号通路 | 第23-24页 |
| 1.5.3 IRE1介导的信号通路 | 第24页 |
| 1.6 LRF与内质网应激 | 第24-26页 |
| 第二章 小鼠胚胎植入的研究进展 | 第26-37页 |
| 2.1 胚胎植入的研究 | 第26-29页 |
| 2.1.1 胚胎植入的相关因子 | 第27-29页 |
| 2.1.2 内质网应激与胚胎植入和蜕膜化 | 第29页 |
| 2.2 基质细胞蜕膜化 | 第29-37页 |
| 2.2.1 子宫蜕膜的功能 | 第30-31页 |
| 2.2.2 激素调节子宫内膜基质细胞蜕膜化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 PGR的信号通路 | 第32-33页 |
| 2.2.4 P_4调节蜕膜化的效应器 | 第33-35页 |
| 2.2.5 ESCs蜕膜化进程中的细胞周期调节 | 第35-37页 |
| 试验研究 | 第37-93页 |
| 第三章 LRF重组慢病毒载体的构建及其表达 | 第37-60页 |
| 3.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.2 主要设备 | 第38-39页 |
| 3.1.3 试验动物 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-50页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.2 RT-PCR | 第40页 |
| 3.2.3 LRF基因的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.4 目的DNA回收 | 第41页 |
| 3.2.5 LRF序列与pMD18-T Simple载体连接 | 第41-42页 |
| 3.2.6 LRF扩增产物与pCD53B载体连接 | 第42-43页 |
| 3.2.7 LRF片段与pCD513B连接 | 第43-44页 |
| 3.2.8 LRF慢病毒shRNA干扰载体的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.9 病毒颗粒的包装 | 第46-47页 |
| 3.2.10 慢病毒包装 | 第47页 |
| 3.2.11 慢病毒滴度测定 | 第47-48页 |
| 3.2.12 LRF过表达效果的鉴定与干扰有效靶点的筛选 | 第48-50页 |
| 3.3 结果 | 第50-58页 |
| 3.3.1 LRF CDS区片段的扩增 | 第50页 |
| 3.3.2 双酶切鉴定pMD18-T-LRF | 第50-51页 |
| 3.3.3 LRF片段连接pCD513B过表达载体 | 第51页 |
| 3.3.4 LRF干扰载体的的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.5 LRF慢病毒过表达载体转染HEK 293T细胞 | 第52-53页 |
| 3.3.6 LRF慢病毒干扰载体转染HEK 293T细胞 | 第53-54页 |
| 3.3.7 病毒滴度测定 | 第54页 |
| 3.3.8 LRF过表达慢病毒感染NIH 3T3细胞 | 第54-55页 |
| 3.3.9 LRF干扰慢病毒感染NIH 3T3细胞 | 第55-57页 |
| 3.3.10 荧光定量PCR检测病毒的过表达与干扰效果 | 第57页 |
| 3.3.11 Western blot检测LRF慢病毒的过表达与干扰效果 | 第57-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 孕酮与雌激素对LRF表达的调节 | 第60-74页 |
| 4.1 试验材料及试验动物 | 第60-62页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第60-61页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第61-62页 |
| 4.1.3 试验动物 | 第62页 |
| 4.2 试验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 小鼠的激素处理 | 第62页 |
| 4.2.2 小鼠原代基质细胞的分离培养 | 第62-63页 |
| 4.2.3 原代基质细胞的纯度鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.4 Western blot分析 | 第64页 |
| 4.2.5 石蜡包埋与免疫组化 | 第64-65页 |
| 4.3 结果 | 第65-72页 |
| 4.3.1 小鼠子宫内膜基质细胞的纯度检测 | 第65-67页 |
| 4.3.2 E2与P4调节LRF在基质细胞中的表达 | 第67页 |
| 4.3.3 Western blot分析P4对LRF的表达调控 | 第67-68页 |
| 4.3.4 免疫组化分析P4对LRF的表达调控 | 第68-69页 |
| 4.3.5 Western blot分析甾类激素及其受体对LRF表达的调节 | 第69-70页 |
| 4.3.6 免疫组化分析甾类激素及其拮抗剂对LRF表达的调节 | 第70-72页 |
| 4.3.7 RU486处理妊娠小鼠对LRF表达的影响 | 第72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-73页 |
| 4.5 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 LRF参与调节小鼠蜕膜化过程中的基质细胞增殖 | 第74-93页 |
| 5.1 试验材料及试验动物 | 第74-76页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第74-75页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第75-76页 |
| 5.1.3 试验动物 | 第76页 |
| 5.2 试验方法 | 第76-80页 |
| 5.2.1 病毒浓缩 | 第76页 |
| 5.2.2 小鼠的处理 | 第76-77页 |
| 5.2.3 原代基质细胞诱导蜕膜化 | 第77-78页 |
| 5.2.4 总RNA提取 | 第78页 |
| 5.2.5 RT-PCR | 第78页 |
| 5.2.6 qRT-PCR | 第78页 |
| 5.2.7 Western blot分析 | 第78-79页 |
| 5.2.8 细胞凋亡检测 | 第79页 |
| 5.2.9 细胞周期检测 | 第79页 |
| 5.2.10 石蜡包埋与组织免疫荧光化学 | 第79-80页 |
| 5.3 试验结果 | 第80-90页 |
| 5.3.1 LRF干扰的小鼠子宫不影响胚胎植入 | 第80-81页 |
| 5.3.2 LRF干扰影响小鼠子宫基质的蜕膜化 | 第81-82页 |
| 5.3.3 LRF mRNA在蜕膜化基质细胞中的表达 | 第82页 |
| 5.3.4 LRF蛋白在蜕膜化基质细胞中的表达 | 第82-83页 |
| 5.3.5 shLRF慢病毒感染原代基质细胞 | 第83-84页 |
| 5.3.6 qRT-PCR检测LRF干扰对基质细胞蜕膜化的影响 | 第84-85页 |
| 5.3.7 Western blot检测LRF干扰对基质细胞蜕膜化的影响 | 第85-86页 |
| 5.3.8 shLRF不影响蜕膜化基质细胞的凋亡 | 第86-87页 |
| 5.3.9 LRF干扰影响蜕膜化基质细胞的增殖 | 第87-88页 |
| 5.3.10 LRF干扰影响子宫蜕膜化进程中基质细胞的增殖 | 第88-89页 |
| 5.3.11 LRF干扰经由cyclin A与cyclin B1抑制基质细胞增殖 | 第89-90页 |
| 5.4 讨论 | 第90-92页 |
| 5.5 小结 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 创新点 | 第94-95页 |
| 进一步研究内容 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-110页 |
| 缩略词 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
