| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-41页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 引言 | 第11页 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌及其危害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 金黄色葡萄球菌分子演变 | 第12-13页 |
| 1.1.4 金黄色葡萄球菌致病性分子基础 | 第13-15页 |
| 1.2 细菌应激反应 | 第15-17页 |
| 1.2.1 引言 | 第15页 |
| 1.2.2 外界环境产生的细菌应激 | 第15-17页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌β-内酰胺类抗生素抗性 | 第17-21页 |
| 1.3.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.3.2 β-内酰胺类抗生素抗性机制 | 第18-21页 |
| 1.4 金黄色葡萄球菌万古霉素抗性 | 第21-32页 |
| 1.4.1 引言 | 第21-22页 |
| 1.4.2 万古霉素杀菌机制 | 第22-24页 |
| 1.4.3 万古霉素耐受金黄色葡萄球菌定义 | 第24-25页 |
| 1.4.4 万古霉素耐受金黄色葡萄球菌表型特征 | 第25-27页 |
| 1.4.5 金黄色葡萄球菌万古霉素耐受分子机制 | 第27-32页 |
| 1.5 金黄色葡萄球菌感染的治疗 | 第32-34页 |
| 1.5.1 万古霉素耐受对治疗结果的影响 | 第32-33页 |
| 1.5.2 万古霉素耐受的治疗方案以及潜在的交叉抗性 | 第33-34页 |
| 1.6 本课题研究内容和目的 | 第34-41页 |
| 1.6.1 引言 | 第34-35页 |
| 1.6.2 金黄色葡萄球菌万古霉素耐受机制研究 | 第35-41页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第41-53页 |
| 2.1 实验菌株和质粒 | 第41-43页 |
| 2.1.1 实验所用质粒 | 第41页 |
| 2.1.2 实验所用菌株 | 第41-42页 |
| 2.1.3 实验所用引物 | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.2.1 DNA凝胶回收及纯化 | 第43页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的抽提 | 第43-44页 |
| 2.2.3 大肠杆菌化转感受态的制备和转化 | 第44页 |
| 2.2.4 金黄色葡萄球菌基因组DNA和质粒的抽提 | 第44-45页 |
| 2.2.5 金黄色葡萄球菌电转感受态的制备和转化 | 第45-46页 |
| 2.2.6 金黄色葡萄球菌总RNA抽提,mRNA反转录和real-time PCR实验 | 第46-47页 |
| 2.2.7 金黄色葡萄球菌全基因组测序 | 第47-48页 |
| 2.2.8 质粒构建 | 第48页 |
| 2.2.9 突变菌株构建 | 第48-49页 |
| 2.2.10 金黄色葡萄球菌相关表型实验 | 第49-50页 |
| 2.2.11 蛋白表达与纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.12 蛋白定量与凝胶阻滞分析实验(EMSA) | 第51-52页 |
| 2.2.13 体外酶活性检测 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第53-81页 |
| 3.1 万古霉素中度耐受金黄色葡萄球菌的筛选 | 第53-57页 |
| 3.2 全基因组深度测序鉴定SV-1遗传变化 | 第57-61页 |
| 3.3 等位替换菌株构建 | 第61-64页 |
| 3.4 等位替换导致的初步表型变化 | 第64-70页 |
| 3.4.1 WalK(G223D)突变导致万古霉素敏感性减弱 | 第64-68页 |
| 3.4.2 Walk(G223D)和FtsZ(L307V)突变不影响金葡菌生长 | 第68页 |
| 3.4.3 WalK(G223D)突变导致细胞壁增厚 | 第68-69页 |
| 3.4.4 Walk(G223D)突变导致金葡菌自溶活性减弱 | 第69-70页 |
| 3.5 WalK突变导致万古霉素敏感性减弱的分子机制研究 | 第70-78页 |
| 3.5.1 WalK(G223D)突变影响了细胞壁代谢相关基因的表达 | 第70-71页 |
| 3.5.2 Walk(G223D))突变导致激酶活性减弱从而降低WalR磷酸化水平 | 第71-76页 |
| 3.5.3 WalK(G223D)减弱了WalR与at1A启动子的结合能力 | 第76-78页 |
| 3.6 总结 | 第78-81页 |
| 第四章 讨论 | 第81-83页 |
| 4.1 万古霉素中度耐受金葡菌机制研究讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第101页 |
