| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-32页 |
| 1.1 过继性NK细胞免疫治疗实体肿瘤 | 第18-26页 |
| 1.1.1 NK细胞表型及杀伤实体肿瘤 | 第18-20页 |
| 1.1.2 ADCC作用 | 第20页 |
| 1.1.3 NK细胞毒性作用机制 | 第20-22页 |
| 1.1.4 NK细胞治疗肿瘤的临床试验 | 第22-24页 |
| 1.1.5 扩增NK细胞的方法 | 第24-26页 |
| 1.2 曲妥珠单抗治疗乳腺癌 | 第26-32页 |
| 1.2.1 曲妥珠单抗的作用机制 | 第27-29页 |
| 1.2.2 曲妥珠单抗耐药的形成 | 第29-32页 |
| 第2章 材料与方法 | 第32-50页 |
| 2.1 细胞 | 第32页 |
| 2.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.3 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.3.1 DMEM-F12培养液 | 第33页 |
| 2.3.2 PBS缓冲液 | 第33-34页 |
| 2.3.3 胰蛋白酶—EDTA消化液 500ml | 第34页 |
| 2.3.4 MTT溶液 | 第34页 |
| 2.3.5 新三联裂解液 | 第34页 |
| 2.3.6 4%台盼蓝母液 | 第34页 |
| 2.3.7 30%Triton X-100 溶液 | 第34页 |
| 2.3.8 钙黄绿素-AM染色液（Calcein-AM） | 第34-35页 |
| 2.4 流式细胞术抗体 | 第35页 |
| 2.5 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.6 主要方法 | 第36-48页 |
| 2.6.1 人乳腺癌细胞的培养 | 第36页 |
| 2.6.2 曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞的诱导及培养 | 第36页 |
| 2.6.3 验证耐药细胞对曲妥珠单抗的耐药作用：MTT | 第36-37页 |
| 2.6.4 曲妥珠单抗敏感及耐药乳腺癌细胞的HER2表达检测：流式细胞术 | 第37-38页 |
| 2.6.5 NK细胞的体外诱导及扩增 | 第38页 |
| 2.6.6 NK细胞的存活率、免疫表型及活性鉴定 | 第38页 |
| 2.6.7 NK细胞对乳腺癌细胞杀伤活性的鉴定：钙黄绿素-AM释放法 | 第38-40页 |
| 2.6.8 曲妥珠单抗对NK细胞的影响：MTT | 第40页 |
| 2.6.9 曲妥珠单抗联合NK细胞对曲妥珠单抗耐药细胞的杀伤作用：钙黄绿素-AM释放法 | 第40-41页 |
| 2.6.10 曲妥珠单抗耐药细胞存在时，曲妥珠单抗对NK细胞活化性受体及抑制性受体的影响：流式细胞术 | 第41-42页 |
| 2.6.11 曲妥珠单抗耐药细胞存在时，曲妥珠单抗对肿瘤细胞表面的NK细胞活化性配体的影响：流式细胞术 | 第42-43页 |
| 2.6.12 曲妥珠单抗对NK细胞分泌细胞因子的影响：ELISA法 | 第43-44页 |
| 2.6.13 曲妥珠单抗对NK细胞分泌细胞因子的影响：CBA试剂盒流式细胞术 | 第44-45页 |
| 2.6.14 曲妥珠单抗耐药细胞存在时，曲妥珠单抗对NK细胞杀伤受体Fas及其配体Fas L的影响：流式细胞术 | 第45-46页 |
| 2.6.15 阻断Fas受体，曲妥珠单抗联合NK细胞对耐药细胞的杀伤作用的影响：钙黄绿素-AM释放法 | 第46-47页 |
| 2.6.16 曲妥珠单抗耐药细胞存在时，曲妥珠单抗对NK细胞内穿孔素与颗粒酶B的表达影响：流式细胞术 | 第47-48页 |
| 2.7 统计学方法 | 第48-50页 |
| 第3章 结果 | 第50-72页 |
| 3.1 与敏感细胞相比，耐药细胞对曲妥珠单抗的敏感性明显减弱 | 第50-51页 |
| 3.2 曲妥珠单抗敏感及耐药的乳腺癌细胞表面HER2表达量的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3 NK细胞的来源及活性检测 | 第52-56页 |
| 3.3.1 NK细胞来源的乳腺癌供者的临床资料 | 第52-53页 |
| 3.3.2 NK细胞的免疫表型、活化及抑制性受体的表达情况 | 第53-54页 |
| 3.3.3 NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性 | 第54-55页 |
| 3.3.4 曲妥珠单抗对NK细胞的增殖抑制作用 | 第55-56页 |
| 3.4 曲妥珠单抗联合NK细胞能够增强对曲妥珠单抗耐药细胞的杀伤作用 | 第56-58页 |
| 3.6 曲妥珠单抗能够通过改变活化及抑制性受配体而增强NK细胞的活性 | 第58-67页 |
| 3.6.1 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下，曲妥珠单抗能够上调NK细胞表面的活化性受体的表达 | 第58-61页 |
| 3.6.2 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下，曲妥珠单抗能够上调乳腺癌表面NK细胞活化性配体的表达 | 第61-62页 |
| 3.6.3 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下，曲妥珠单抗能下调NK细胞表面抑制性受体的表达 | 第62-67页 |
| 3.7 曲妥珠单抗与NK细胞联合能够通过增加环境中细胞因子的分泌而增强对敏感及耐药细胞的杀伤作用 | 第67-68页 |
| 3.8 曲妥珠单抗能够通过增加NK细胞凋亡受配体Fas及Fas L的表达 | 第68-69页 |
| 3.8.1 无论在敏感型还是耐药型细胞存在的环境下，曲妥珠单抗能够增加肿瘤细胞表面NK细胞凋亡受体Fas及NK细胞表面Fas L配体的表达 | 第68-69页 |
| 3.8.2 在阻断凋亡受体Fas后，曲妥珠单抗与NK细胞对耐药细胞的联合杀伤作用被部分阻断 | 第69页 |
| 3.9 肿瘤细胞环境下，曲妥珠单抗对于NK细胞内的杀伤因子穿孔素及颗粒酶B生成的影响 | 第69-72页 |
| 第4章 讨论 | 第72-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-92页 |
| 攻读博士期间主要学术成果 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
