| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 鹿茸的特征与生长 | 第12-14页 |
| 1.2 鹿茸的成分 | 第14-15页 |
| 1.3 影响鹿茸生长的因素 | 第15-16页 |
| 1.3.1 影响活体鹿茸生长发育的因素 | 第15页 |
| 1.3.2 影响离体鹿茸细胞的因素 | 第15-16页 |
| 1.4 雄激素及AR的结构与功能 | 第16-21页 |
| 1.4.1 雄激素的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.4.2 AR的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.4.3 雄激素及其受体对梅花鹿产茸性状的调控作用 | 第18-21页 |
| 1.5 RNA干扰技术 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要溶液及相关缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第26页 |
| 2.2.2 软骨细胞的分离、培养与冻存 | 第26-28页 |
| 2.2.3 AR引物设计 | 第28-29页 |
| 2.2.4 软骨细胞总RNA提取及检测 | 第29页 |
| 2.2.5 第一链cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.6 PCR反应 | 第30-31页 |
| 2.2.7 PCR产物的回收纯化 | 第31页 |
| 2.2.8 测序 | 第31页 |
| 2.2.9 测序结果分析 | 第31-32页 |
| 2.2.10 siRNA的设计与合成 | 第32-33页 |
| 2.2.11 转染及条件优化 | 第33-34页 |
| 2.2.12 RNA提取检测及反转录 | 第34页 |
| 2.2.13 转染后软骨细胞相关基因相对表达量分析 | 第34-35页 |
| 2.2.14 转染后软骨细胞相关蛋白的Western blot分析 | 第35-38页 |
| 2.2.15 软骨细胞转染后细胞活性检测 | 第38-39页 |
| 2.2.16 软骨细胞转染后细胞周期检测 | 第39页 |
| 2.2.17 转染后软骨细胞凋亡检测 | 第39页 |
| 2.2.18 酶联免疫反应检测 | 第39-40页 |
| 2.3 统计分析 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-57页 |
| 3.1 鹿茸软骨细胞的培养 | 第41-42页 |
| 3.2 AR基因序列的获得 | 第42-48页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第42-43页 |
| 3.2.2 四对引物PCR凝胶电泳结果 | 第43-44页 |
| 3.2.3 获得的AR基因序列 | 第44页 |
| 3.2.4 核苷酸序列同源性比对 | 第44-46页 |
| 3.2.5 氨基酸序列同源性比对 | 第46-48页 |
| 3.3 转染后提取的鹿茸软骨细胞总RNA | 第48-49页 |
| 3.4 最佳siRNA的筛选 | 第49-51页 |
| 3.4.1 qPCR检测AR基因mRNA表达量 | 第49-50页 |
| 3.4.2 Western Blot检测蛋白表达量 | 第50-51页 |
| 3.5 qPCR检测AR基因的mRNA水平表达情况 | 第51-52页 |
| 3.6 Western Blot检测AR蛋白的表达情况 | 第52-53页 |
| 3.7 AR siRNA对软骨细胞增殖的影响 | 第53页 |
| 3.8 AR siRNA对软骨细胞周期的影响 | 第53-55页 |
| 3.9 AR siRNA对软骨细胞凋亡的影响 | 第55-56页 |
| 3.10 AR siRNA对软骨细胞睾酮和雌二醇激素分泌的影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 梅花鹿鹿茸软骨细胞AR基因序列的获得 | 第57-58页 |
| 4.2 AR siRNA对梅花鹿鹿茸软骨细胞生长发育的影响 | 第58-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
