| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-27页 |
| 1.1 病害对植物的影响以及抵抗系统 | 第18-19页 |
| 1.2 CC-NBS-LRR结构分析与域研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1 CC-NBS-LRR结构分析 | 第19页 |
| 1.2.2 植物内CC-NBS-LRR结构抗病蛋白研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 农杆菌介导的遗传转化机理及其研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 农杆菌介导的机制原理 | 第21-22页 |
| 1.3.2 农杆菌介导法的应用进展 | 第22-23页 |
| 1.4 农杆菌介导烟草瞬时表达原理机制及相关研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4.1 农杆菌介导的烟草瞬时表达的基本原理 | 第23页 |
| 1.4.2 农杆菌瞬时表达的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 转基因遗传转化原理以及转化中影响因子 | 第24-25页 |
| 1.5.1 转基因组织培养的基本原理 | 第24页 |
| 1.5.2 番茄转基因遗传转化以及相关影响因子 | 第24-25页 |
| 1.6 本研究的目的、内容和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第27-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 实验质粒和感受态菌株 | 第27页 |
| 2.2 实验中涉及的主要设备和仪器 | 第27-29页 |
| 2.3 主要相关试剂 | 第29页 |
| 2.3.1 分子实验中常用酶 | 第29页 |
| 2.3.2 常用试剂 | 第29页 |
| 2.4 常用溶剂和溶液配方 | 第29-40页 |
| 2.4.1 MS培养基的配制及其母液配方 | 第29-31页 |
| 2.4.2 MS培养基中激素配方 | 第31-32页 |
| 2.4.3 组织培养的培养基配方 | 第32-37页 |
| 2.4.4 分子实验中LB基础培养基配方 | 第37页 |
| 2.4.5 电泳胶缓冲液TAE配方 | 第37页 |
| 2.4.6 SOC培养基的配方 | 第37-38页 |
| 2.4.7 菌落鉴定快提液裂解液配方 | 第38页 |
| 2.4.8 植物DNA提取液CTAB缓冲液配方 | 第38-39页 |
| 2.4.9 烟草中瞬时表达系统相关试剂的配方 | 第39-40页 |
| 2.4.10 蛋白质提取液配方 | 第40页 |
| 2.5 基因分子实验方法 | 第40-50页 |
| 2.5.1 基因载体构建的基本过程 | 第40-41页 |
| 2.5.2 引物设计方法和基本要求 | 第41-42页 |
| 2.5.3 番茄总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.5.4 扩增基因的PCR反应体系和程序 | 第43-44页 |
| 2.5.5 连接转化 | 第44页 |
| 2.5.6 菌落PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5.7 琼脂糖凝胶电泳及检测方法 | 第45页 |
| 2.5.8 质粒提取 | 第45-46页 |
| 2.5.9 质粒酶切鉴定 | 第46页 |
| 2.5.10 基因测序 | 第46页 |
| 2.5.11 基因质粒酶切并回收 | 第46-47页 |
| 2.5.12 目的基因DDB1IP9连接载体pBI121：：35S | 第47-48页 |
| 2.5.13 大肠杆菌DH5α感受态制备方法 | 第48页 |
| 2.5.14 农杆菌EHA105感受态的制备和转化 | 第48-50页 |
| 2.6 烟草农杆菌瞬时表达方法以及蛋白提取方法 | 第50-51页 |
| 2.6.1 烟草瞬时表达方法 | 第50页 |
| 2.6.2 蛋白质提取方法 | 第50-51页 |
| 2.7 组织培养方法 | 第51-52页 |
| 2.7.1 萌发种子实验 | 第51页 |
| 2.7.2 预培养 | 第51页 |
| 2.7.3 农杆菌侵染 | 第51-52页 |
| 2.7.4 Kana抗性梯度筛选 | 第52页 |
| 2.7.5 愈伤生根培养 | 第52页 |
| 2.8 转基因植株的阳性鉴定及半定量分析 | 第52-54页 |
| 2.8.1 转基因苗总DNA提取方法及转基因苗的阳性鉴定 | 第52-53页 |
| 2.8.2 DDB1IP9半定量RT-PCR分析方法 | 第53-54页 |
| 2.9 病菌接种方法以及叶片菌落数计算方法 | 第54-55页 |
| 2.9.1 病菌接种 | 第54页 |
| 2.9.2 比较染病菌株叶片菌落数 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第55-64页 |
| 3.1 植物表达载体的构建 | 第55-58页 |
| 3.1.1 番茄DDB1IP9基因获取和扩增 | 第55页 |
| 3.1.2 中间载体pEASY-Blunt-DDB1IP9构建 | 第55-56页 |
| 3.1.3 番茄基因DDB1IP9连接到表达载体pBI121：：35S | 第56-57页 |
| 3.1.4 pBI121：：DDB1IP9质粒转入到农杆菌 | 第57-58页 |
| 3.2 DDB1IP9基因在番茄中的组织培养及遗传转化 | 第58-60页 |
| 3.2.1 预培养和共培养 | 第58页 |
| 3.2.2 愈伤组织在梯度抗生素K60培养基上的筛选分化 | 第58-59页 |
| 3.2.3 愈伤组织在梯度抗生素K65培养基上的筛选分化 | 第59页 |
| 3.2.4 愈伤组织在梯度抗生素K70培养基上筛选 | 第59页 |
| 3.2.5 生根培养基筛选生根出苗 | 第59-60页 |
| 3.3 转基因苗的阳性鉴定和表型的观察 | 第60-61页 |
| 3.3.1 载体标物NPTⅡ阳性鉴定 | 第60页 |
| 3.3.2 DDB1IP9转基因植株半定量分析 | 第60-61页 |
| 3.4 烟草瞬时表达 | 第61页 |
| 3.5 转基因苗的抗病性鉴定和表型的观察 | 第61-64页 |
| 3.5.1 接种Pst.DC3000的染病情况 | 第61-62页 |
| 3.5.2 发病植株菌落数量差异分析 | 第62-64页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第64-66页 |
| 4.1 实验结论 | 第64页 |
| 4.2 讨论和展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第74页 |
