摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
缩略语表 | 第11-13页 |
1 综述 | 第13-23页 |
1.1 肝再生的研究进展 | 第13-15页 |
1.1.1 肝再生的概念 | 第13页 |
1.1.2 肝再生动物模型的建立 | 第13-14页 |
1.1.3 肝再生进程及重要调控因子 | 第14-15页 |
1.2 DNA甲基化研究进展 | 第15-17页 |
1.2.1 DNA甲基化研究 | 第15-16页 |
1.2.2 DNA甲基化对基因转录的影响 | 第16-17页 |
1.3 基于第二代测序技术的甲基化研究方法 | 第17-20页 |
1.3.1 第二代测序技术 | 第17-18页 |
1.3.2 简化的表观亚硫酸氢盐测序法 | 第18页 |
1.3.3 全基因组亚硫酸氢盐测序法 | 第18-19页 |
1.3.4 Tet辅助重亚硫酸测序法 | 第19页 |
1.3.5 甲基化DNA的免疫共沉淀测序 | 第19-20页 |
1.4 第二代测序技术在甲基化研究中的应用与进展 | 第20-21页 |
1.4.1 第二代测序技术在甲基化研究中的应用 | 第20页 |
1.4.2 第二代测序技术在甲基化研究中的进展 | 第20-21页 |
1.5 本文研究目的和意义 | 第21-23页 |
1.5.1 研究目的 | 第21-22页 |
1.5.2 研究方案 | 第22页 |
1.5.3 研究意义 | 第22-23页 |
2 MeDIP-seq技术筛选大鼠肝再生相关甲基化基因 | 第23-35页 |
引言 | 第23-24页 |
2.1 实验材料 | 第24-25页 |
2.1.1 实验动物 | 第24页 |
2.1.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
2.2 实验方法 | 第25-29页 |
2.2.1 大鼠 2/3 肝切除诱导的肝再生模型制备 | 第25-26页 |
2.2.2 大鼠肝组织基因组DNA提取与检测 | 第26页 |
2.2.3 甲基化基因的文库构建 | 第26-27页 |
2.2.4 文库测序与分析 | 第27-28页 |
2.2.5 肝再生相关的甲基化基因鉴定 | 第28页 |
2.2.6 系统生物学分析 | 第28-29页 |
2.3 实验结果 | 第29-33页 |
2.3.1 MeDIP-seq测序结果 | 第29-31页 |
2.3.2 大鼠肝再生相关的甲基化基因 | 第31页 |
2.3.3 大鼠肝再生相关的甲基化基因的作用 | 第31-33页 |
2.4 讨论 | 第33-35页 |
3 甲基化基因Fcgr2a启动子区甲基化与大鼠肝再生的相关性研究 | 第35-47页 |
引言 | 第35-36页 |
3.1 实验材料 | 第36-38页 |
3.1.1 实验动物 | 第36页 |
3.1.2 实验仪器设备 | 第36-37页 |
3.1.3 主要试剂与溶液 | 第37-38页 |
3.2 实验方法 | 第38-42页 |
3.2.1 大鼠 2/3 肝切除诱导的肝再生模型制备 | 第38页 |
3.2.2 DH5α大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38-39页 |
3.2.3 DNA的提取与浓度测定 | 第39页 |
3.2.4 亚硫酸盐测序 | 第39-41页 |
3.2.5 Biq analyzer软件分析测序结果 | 第41-42页 |
3.2.6 转录因子结合位点(TFBs)预测 | 第42页 |
3.3 实验结果 | 第42-45页 |
3.3.1 Fcgr2a亚硫酸盐测序结果 | 第42页 |
3.3.2 大鼠肝再生中Fcgr2a启动子区甲基化变化 | 第42-44页 |
3.3.3 转录因子结合位点预测 | 第44-45页 |
3.4 讨论 | 第45-47页 |
4 甲基化对Fcgr2a基因表达的影响 | 第47-57页 |
引言 | 第47-48页 |
4.1 实验材料 | 第48-49页 |
4.1.1 实验动物 | 第48页 |
4.1.2 实验仪器设备 | 第48页 |
4.1.3 主要试剂与溶液 | 第48-49页 |
4.2 实验方法 | 第49-52页 |
4.2.1 大鼠 2/3 肝切除诱导的肝再生模型制备 | 第49页 |
4.2.2 RNA的提取与浓度测定 | 第49-50页 |
4.2.3 q RT-PCR | 第50-51页 |
4.2.4 Western Blot | 第51-52页 |
4.2.5 统计学分析 | 第52页 |
4.3 实验结果 | 第52-53页 |
4.3.1 DNA甲基化对Fcgr2a表达的影响 | 第52-53页 |
4.3.2 DNA甲基化对Fcgr2a蛋白表达的影响 | 第53页 |
4.4 讨论 | 第53-57页 |
结论 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-65页 |
致谢 | 第65-67页 |
攻读硕士学位期间参加的科研项目和已发表论文 | 第67-68页 |