| 英文缩略词表 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-15页 |
| 英文摘要 | 第15-23页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 研究一 吉非替尼通过上调非小细胞肺癌细胞自噬水平诱导影响顺铂疗效的作用及机制研究 | 第25-57页 |
| 1 前言 | 第25-26页 |
| 2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1 细胞株 | 第26-27页 |
| 2.2 药品及试剂 | 第27-28页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第28页 |
| 2.4 常用液的配置 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-34页 |
| 3.1 细胞培养与传代 | 第29页 |
| 3.2 细胞计数 | 第29页 |
| 3.3 体外增殖抑制实验 | 第29-30页 |
| 3.4 药物反应检测 | 第30页 |
| 3.5 Annexin V-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 | 第30页 |
| 3.6 Western-Blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Bax、Bcl-2表达 | 第30-33页 |
| 3.6.1 抗原蛋白提取 | 第30-31页 |
| 3.6.2. 配置SDS-PAGE胶 | 第31页 |
| 3.6.3 蛋白定量 | 第31页 |
| 3.6.4 蛋白电泳 | 第31-32页 |
| 3.6.5 转膜 | 第32-33页 |
| 3.6.6 封闭、杂交和显色 | 第33页 |
| 3.7 细胞周期检测 | 第33-34页 |
| 3.8 透射电子显微镜 | 第34页 |
| 3.9 统计学方法 | 第34页 |
| 4 结果 | 第34-49页 |
| 4.1 吉非替尼联合顺铂导致拮抗效应 | 第34-37页 |
| 4.1.1 吉非替尼和/或顺铂对PC9细胞增殖率的影响 | 第34-36页 |
| 4.1.2 吉非替尼和顺铂联合用于PC9和A549细胞的相互作用 | 第36-37页 |
| 4.2 吉非替尼联合顺铂诱导产生自噬 | 第37-43页 |
| 4.2.1 吉非替尼联合顺铂对PC9细胞自噬水平的影响 | 第37-40页 |
| 4.2.2 抑制自噬对吉非替尼和顺铂对PC9细胞作用的影响 | 第40-43页 |
| 4.3 抑制自噬可抵抗吉非替尼和顺铂间的拮抗效应 | 第43-47页 |
| 4.3.1 CQ对PC9细胞溶酶体降解和自噬水平的影响 | 第43页 |
| 4.3.2 CQ抑制自噬对PC9细胞增殖力和凋亡的影响 | 第43-47页 |
| 4.4 抑制自噬可促进凋亡 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| 5.1 吉非替尼与顺铂联用存在拮抗作用 | 第50页 |
| 5.2 自噬是吉非替尼和顺铂拮抗作用的原因之一 | 第50-51页 |
| 5.3 吉非替尼和顺铂拮抗作用可能机制 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 7 参考文献 | 第53-57页 |
| 研究二 吉非替尼通过外泌体上调自噬拮抗顺铂诱导的非小细胞肺癌细胞凋亡的作用研究 | 第57-86页 |
| 1 前言 | 第57-58页 |
| 2 实验材料 | 第58-60页 |
| 2.1 细胞株 | 第58页 |
| 2.2 药品及试剂 | 第58-59页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第59-60页 |
| 2.4 常用液的配置 | 第60页 |
| 3 实验方法 | 第60-65页 |
| 3.1 细胞培养与传代 | 第60-61页 |
| 3.2 体外增殖抑制实验 | 第61页 |
| 3.3 药物反应检测 | 第61页 |
| 3.4 Annexin V-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 | 第61-62页 |
| 3.5 Western-Blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Bax、Bcl-2、CD63表达 | 第62-64页 |
| 3.5.1 抗原蛋白提取 | 第62页 |
| 3.5.2 配置SDS-PAGE胶 | 第62页 |
| 3.5.3 蛋白定量 | 第62-63页 |
| 3.5.4 蛋白电泳 | 第63页 |
| 3.5.5 转膜 | 第63-64页 |
| 3.5.6 封闭、杂交和显色 | 第64页 |
| 3.6 外泌体分离 | 第64-65页 |
| 3.7 外泌体的鉴定 | 第65页 |
| 3.8 统计学方法 | 第65页 |
| 4 结果 | 第65-80页 |
| 4.1 吉非替尼合并顺铂治疗产生拮抗效应 | 第65-67页 |
| 4.1.1 不同浓度吉非替尼联合顺铂治疗对PC9细胞的抑制率 | 第65-66页 |
| 4.1.2 吉非替尼和顺铂在PC9和A549细胞中的互相作用 | 第66-67页 |
| 4.2 PC9细胞产生的外泌体的鉴定 | 第67-68页 |
| 4.3 Exo-GF降低顺铂的抗肿瘤活性 | 第68-71页 |
| 4.3.1 Exo-GF和Exo-DDP分别对顺铂和吉非替尼作用的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.2 抑制外泌体分泌对吉非替尼和顺铂间相互作用的影响 | 第69-71页 |
| 4.4 Exo-GF通过上调自噬导致影响顺铂对PC9细胞疗效 | 第71-75页 |
| 4.4.1 Exo-GF及Exo-DDP对PC9细胞自噬水平的影响 | 第71-73页 |
| 4.4.2 Exo-GF对顺铂诱导PC9细胞自噬水平的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.3 Exo-DDP对吉非替尼诱导PC9细胞自噬水平的影响 | 第74-75页 |
| 4.5 Exo-GF下调顺铂诱导的细胞凋亡 | 第75-80页 |
| 4.5.1 Exo-GF和Exo-DDP分别对顺铂和吉非替尼诱导PC9细胞凋亡的影响 | 第75-77页 |
| 4.5.2 Exo-GF和Exo-DDP对PC9细胞凋亡蛋白的影响 | 第77-80页 |
| 5 讨论 | 第80-81页 |
| 5.1 外泌体影响肿瘤化疗疗效的可能机制 | 第80页 |
| 5.2 解决外泌体诱导TKIs与化疗药物拮抗的相关机制 | 第80-81页 |
| 6 结论 | 第81页 |
| 7 参考文献 | 第81-86页 |
| 个人简历 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 综述 | 第88-97页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
