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miR-128在丝裂霉素C诱导DNA损伤应答中的作用机制研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 研究背景综述第9-26页
    1.1 DNA损伤应答第9-19页
        1.1.1 DNA损伤的类型第9-10页
        1.1.2 DNA损伤修复的类型第10-17页
            1.1.2.1 直接修复第10页
            1.1.2.2 碱基切除修复第10-11页
            1.1.2.3 核苷酸切除修复第11-13页
            1.1.2.4 错配修复第13-14页
            1.1.2.5 同源重组修复第14页
            1.1.2.6 非同源末端连接第14-15页
            1.1.2.7 DNA交联损伤修复第15-17页
        1.1.3 丝裂霉素C第17-19页
            1.1.3.1 丝裂霉素C的概述第18页
            1.1.3.2 MMC抗肿瘤作用机制第18-19页
    1.2 血影蛋白第19-22页
        1.2.1 血影蛋白简介第19-20页
        1.2.2 血影蛋白功能和DDR的关系第20-22页
    1.3 microRNA 和 DDR第22-26页
        1.3.1 microRNA概述第22-24页
        1.3.2 miRNA在DDR中的作用第24-26页
第二章 实验材料与方法第26-39页
    2.1 实验材料第26-28页
        2.1.1 细胞株第26页
        2.1.2 主要试剂第26-27页
        2.1.3 实验中所使用的主要仪器第27-28页
        2.1.4 实验中涉及的引物第28页
    2.2 实验方法第28-38页
        2.2.1 细胞培养第28页
        2.2.2 细胞转染实验及丝裂霉素C刺激实验第28-29页
        2.2.3 细胞RNA的提取第29-30页
        2.2.4 细胞蛋白提取及免疫印记第30页
        2.2.5 荧光实时定量PCR第30-33页
            2.2.5.1 miRNA表达水平检测第30-31页
            2.2.5.2 mRNA表达水平检测第31-33页
        2.2.6 生物信息学预测并筛选靶位点第33页
        2.2.7 miR-128靶点生物信息学分析第33页
        2.2.8 PI法检测细胞周期第33页
        2.2.9 细胞中期染色分析实验第33-34页
        2.2.10 免疫荧光共定位第34页
        2.2.11 Annexin V/PI法检测细胞凋亡第34-35页
        2.2.12 荧光素酶活性检测第35-36页
        2.2.13 EdU细胞增殖实验第36-37页
        2.2.14 细胞克隆形成实验第37-38页
    2.3 实验数据的统计分析第38-39页
第三章 实验结果第39-63页
    3.1 不同浓度MMC刺激对细胞活力的影响第39-40页
    3.2 MMC刺激细胞导致染色体结构异常和DNA损伤第40-41页
    3.3 MMC对αⅡ Sp mRNA和蛋白水平的影响第41-42页
    3.4 MMC刺激后miR-128表达水平上调第42-43页
    3.5 生物信息软件预测miR-128靶向SPTAN1的3’UTR第43页
    3.6 荧光素酶报告实验验证miR-128靶向SPTAN1的3’-UTR第43-44页
    3.7 过表达或下调miR-128影响αⅡ Sp的表达水平第44-46页
    3.8 miR-128抑制细胞分裂增殖能力第46-47页
    3.9 miR-128对细胞细胞周期的影响第47-48页
    3.10 miR-128对细胞凋亡的影响第48-49页
    3.11 miR-128导致细胞染色体异常第49-50页
    3.12 miR-128破坏αⅡ Sp/FANCA/XPF形成的复合物第50-52页
    3.13 miR-128靶点生物信息学分析第52-63页
讨论与展望第63-65页
附录第65-68页
参考文献第68-72页
攻读硕士学位期间发表成果第72-73页
致谢第73-74页

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