| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 合成生物学 | 第12页 |
| 1.2 生物学调控方式 | 第12-13页 |
| 1.3 蛋白降解系统ClpXP-SsrA | 第13-17页 |
| 1.3.1 生物体蛋白降解系统 | 第13-14页 |
| 1.3.2 ClpX蛋白的发现及生化特征 | 第14-16页 |
| 1.3.3 ClpP蛋白的结构和生化特征 | 第16页 |
| 1.3.4 接头蛋白SspB | 第16-17页 |
| 1.3.5 降解信号标签 | 第17页 |
| 1.4 细菌群体感应系统 | 第17-20页 |
| 1.4.1 群体感应系统 | 第17-18页 |
| 1.4.2 群体感应系统基本原理 | 第18-19页 |
| 1.4.3 不同调控分子的交叉 | 第19页 |
| 1.4.4 群体感应系统调控分子LuxR | 第19-20页 |
| 1.5 筛选 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的选题目的和主要研究内容 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-26页 |
| 第二章 定向演化蛋白降解系统ClpXP-SsrA来产生正交对 | 第26-43页 |
| 2.1 引言 | 第26-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 大肠杆菌菌株及基因型 | 第29页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 主要的酶 | 第29-30页 |
| 2.2.4 质粒 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第31-32页 |
| 2.3.2 筛选条件确定 | 第32页 |
| 2.3.3 易错聚合酶链式反应 | 第32-33页 |
| 2.3.4 Dual selection | 第33页 |
| 2.3.5 Screening | 第33页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.4.1 clpX基因的扩增与表达 | 第33-35页 |
| 2.4.2 Dual selection毒性蛋白的选择 | 第35-37页 |
| 2.4.3 Dual selection易于产生假阳性结果 | 第37-39页 |
| 2.4.4 Screening | 第39-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-43页 |
| 第三章 改造群体感应系统LuxR来产生不同的DNA识别特异性 | 第43-56页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1 大肠杆菌菌株及基因型 | 第44-45页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第45页 |
| 3.2.3 主要的酶 | 第45页 |
| 3.2.4 质粒 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第46-47页 |
| 3.3.2 易错聚合酶链式反应 | 第47页 |
| 3.3.3 MegaWHOP构建全质粒 | 第47页 |
| 3.3.4 Selection | 第47-48页 |
| 3.3.5 突变体荧光测定 | 第48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-53页 |
| 3.4.1 初步筛选LuxR突变体 | 第48-51页 |
| 3.4.2 检验筛选结果 | 第51-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 附录一 常规试剂与药品 | 第56-58页 |
| 附录二 主要溶液配置 | 第58-59页 |
| 附录三 主要仪器设备 | 第59-60页 |
| 附录四 常规实验方法 | 第60-63页 |
| 附录五 主要的引物 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
