| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 1 材料与方法 | 第17-24页 |
| 1.1 主要材料试剂 | 第17-18页 |
| 1.2 试剂配制 | 第18-24页 |
| 2 | 第24-44页 |
| 2.0 细胞培养实验 | 第24-25页 |
| 2.0.1 细胞生长条件 | 第24页 |
| 2.0.2 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.0.3 细胞传代 | 第24页 |
| 2.0.4 细胞冻存 | 第24-25页 |
| 2.1 细胞中总RNA的提取及定量 | 第25页 |
| 2.2 反转录PCR合成cDNA第一链 | 第25-26页 |
| 2.3 感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.4 构建PRL3真核过表达质粒和shRNA干扰质粒 | 第26-31页 |
| 2.4.1 引物设计与PRL3基因亚克隆 | 第26-28页 |
| 2.4.2 使用莱枫微量DNA回收试剂盒进行目的片段的回收 | 第28页 |
| 2.4.3 连接目的基因片段PRL3与T载体 | 第28页 |
| 2.4.4 亚克隆至目的载体pIRES2-EGFP和pmCherry-C1 | 第28-29页 |
| 2.4.5 PRL3短发夹RNA的设计与构建 | 第29-31页 |
| 2.5 重组蛋白GST-PRL3的原核表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.6 GST-PRL3 pull-down实验验证PRL3与 β-Tubulin相互作用 | 第32-33页 |
| 2.7 免疫沉淀证明PRL3与 β-Tubulin的相互作用 | 第33页 |
| 2.8 PRL3瞬时沉默和过表达细胞系构建 | 第33-34页 |
| 2.9 PRL3过表达和沉默慢病毒包装和感染胶质瘤细胞 | 第34-35页 |
| 2.10 mCherry-β3-Tubulin重组质粒构建和 β3-Tubulin磷酸化突变体S172A、S172D和S172E的构建 | 第35-40页 |
| 2.11 β3-Tubulin的突变体与细胞微管的共定位分析 | 第40-41页 |
| 2.12 PRL3过表达和沉默对胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第41-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-55页 |
| 3.1 PRL3原核过表达与纯化和互作蛋白验证 | 第44-45页 |
| 3.1.1 重组蛋白GST-PRL3的原核表达与小规模纯化 | 第44-45页 |
| 3.1.2 GST-pulldown和IP验证先期质谱结果 | 第45页 |
| 3.2 PRL3真核过表达质粒pIRES2-EGFP-PRL3和PRL3 shRNA干扰质粒的克隆与构建 | 第45-47页 |
| 3.3 pIRES2-EGFP-PRL3和pGenesil-siPRL3干扰质粒的瞬时转染 | 第47-48页 |
| 3.4 慢病毒感染实验结果 | 第48-49页 |
| 3.5 Transwell实验和划痕愈合实验 | 第49-50页 |
| 3.6 β3-Tubulin基因克隆和磷酸化突变体的构建 | 第50-52页 |
| 3.7 mCherry-β3-Tubulin和mCherry-PRL3融合蛋白真核表达质粒构建 | 第52-53页 |
| 3.8 微管结构染色与共定位实验 | 第53-54页 |
| 3.9 统计与分析 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 综述 | 第67-84页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
