| 致谢 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-34页 |
| 1.1 Hippo信号通路 | 第19-21页 |
| 1.1.1 Hippo信号通路的组成 | 第19-20页 |
| 1.1.2 Hippo信号通路的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.2 LATS1/2激酶的调控机制与生物学功能 | 第21-22页 |
| 1.2.1 LATS1/2激酶的调控机制 | 第21-22页 |
| 1.2.2 LATS1/2激酶的生物学功能 | 第22页 |
| 1.3 YAP的调控机制以及生物学功能 | 第22-30页 |
| 1.3.1 YAP的发现及结构 | 第23页 |
| 1.3.2 YAP活性的调控机制 | 第23-26页 |
| 1.3.3 YAP作为转录辅激活因子发挥作用 | 第26-28页 |
| 1.3.4 YAP在癌症中的作用 | 第28-30页 |
| 1.4 E3泛素连接酶APC/C复合物 | 第30-31页 |
| 1.4.1 APC/C复合物的组成 | 第30页 |
| 1.4.2 APC/C复合物在细胞周期中的功能 | 第30-31页 |
| 1.5 去泛素化酶USP9X | 第31-34页 |
| 1.5.1 USP9X在进化上高度保守 | 第31页 |
| 1.5.2 USP9X的细胞学功能 | 第31-32页 |
| 1.5.3 USP9X在肿瘤中的作用 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-44页 |
| 2.1.1 细胞 | 第34页 |
| 2.1.2 小鼠 | 第34页 |
| 2.1.3 质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.4 抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.5 shRNA, siRNA与sgRNA靶序列 | 第36-37页 |
| 2.1.6 RT-qPCR引物序列 | 第37-38页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.8 主要试剂 | 第39-41页 |
| 2.1.9 主要溶液的配制 | 第41-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-52页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第44页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第44-45页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第45页 |
| 2.2.4 细胞感染 | 第45-46页 |
| 2.2.5 CRISPR/Cas9构建敲除USP9X的细胞 | 第46页 |
| 2.2.6 RNA提取 | 第46页 |
| 2.2.7 RNA逆转录 | 第46页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 2.2.9 免疫印迹 | 第47-48页 |
| 2.2.10 免疫沉淀 | 第48页 |
| 2.2.11 免疫荧光 | 第48-49页 |
| 2.2.12 体外激酶活性实验 | 第49页 |
| 2.2.13 细胞内蛋白泛素化水平检测实验 | 第49页 |
| 2.2.14 体外蛋白去泛素化实验 | 第49页 |
| 2.2.15 串联亲和纯化 | 第49-50页 |
| 2.2.16 细胞同步化 | 第50页 |
| 2.2.17 细胞周期检测 | 第50页 |
| 2.2.18 GST蛋白纯化 | 第50页 |
| 2.2.19 细胞组分分离 | 第50-51页 |
| 2.2.20 软琼脂克隆形成实验 | 第51页 |
| 2.2.21 裸鼠成瘤实验 | 第51-52页 |
| 第三章 鉴定LATS2的相互作用蛋白 | 第52-60页 |
| 3.1 发现APC/C复合物亚基和USP9X是LATS2的相互作用蛋白 | 第52-55页 |
| 3.1.1 串联亲和纯化发现LATS2的相互作用蛋白 | 第52-53页 |
| 3.1.2 LATS2和APC1以及APC/C复合物的其他亚基存在相互作用 | 第53-54页 |
| 3.1.3 LATS2和USP9X存在相互作用 | 第54-55页 |
| 3.2 APC1和USP9X分别与LATS2的不同区域存在相互作用 | 第55-60页 |
| 3.2.1 APC1的1649-1748片段和LATS2的N端1-90区域存在相互作用 | 第55-57页 |
| 3.2.2 USP9X的N端和LATS2的400-619区域存在相互作用 | 第57-60页 |
| 第四章 APC/C复合物不调控LATS2的亚细胞定位、蛋白稳定性以及激酶活性 | 第60-66页 |
| 4.1 LATS2的亚细胞定位 | 第60-62页 |
| 4.1.1 LATS2定位在胞内特殊的膜泡状结构上 | 第60页 |
| 4.1.2 LATS2可以自由穿梭细胞核 | 第60-61页 |
| 4.1.3 LATS2和APC1在细胞内存在共定位 | 第61-62页 |
| 4.2 LATS2不是APC/C复合物的底物 | 第62-66页 |
| 4.2.1 LATS2蛋白的亚细胞定位不受APC1调控 | 第62-63页 |
| 4.2.2 LATS2蛋白稳定性不受APC/C复合物调控 | 第63-64页 |
| 4.2.3 LATS2激酶活性不受APC1调控 | 第64页 |
| 4.2.4 LATS2可提高APC1的磷酸化水平 | 第64-66页 |
| 第五章 USP9X是LATS2的去泛素化酶 | 第66-71页 |
| 5.1 USP9X影响LATS2的蛋白量 | 第66-67页 |
| 5.2 USP9X保护LATS2使其不能被蛋白酶体降解 | 第67-69页 |
| 5.3 去泛素化酶USP9X可以去泛素化LATS2 | 第69-71页 |
| 第六章 USP9X通过Hippo信号通路在胰腺癌中发挥抑癌作用 | 第71-77页 |
| 6.1 胰腺癌细胞中敲减USP9X可激活YAP | 第71-73页 |
| 6.1.1 不同的细胞中敲减USP9X对YAP活性的影响不同 | 第71-72页 |
| 6.1.2 在胰腺癌细胞中敲减USP9X可激活YAP | 第72-73页 |
| 6.2 胰腺癌中USP9X通过Hippo信号通路发挥抑癌作用 | 第73-77页 |
| 6.2.1 USP9X在胰腺癌中发挥抑癌作用 | 第73-74页 |
| 6.2.2 Hippo信号通路介导USP9X的抑癌作用 | 第74-77页 |
| 第七章 总结 | 第77-79页 |
| 第八章 讨论 | 第79-82页 |
| 参考文献 | 第82-98页 |
| 作者简历及科研成果 | 第98-99页 |
