| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 小鼠T淋巴细胞受体CTLA-4基因的克隆 | 第18-27页 |
| 1 材料与方法 | 第18-23页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·器材 | 第18-19页 |
| ·动物及质粒载体 | 第19页 |
| ·生物及化学试剂 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-23页 |
| ·总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR(cDNA第一链合成) | 第20-21页 |
| ·CTLA-4扩增产物与EZ-T克隆载体的连接和转化 | 第21页 |
| ·克隆的菌液PCR及酶切鉴定、测序及序列比较 | 第21-23页 |
| ·体外转录制备CTLA4-mRNA | 第23页 |
| 2 实验结果 | 第23-26页 |
| ·CTLA-4基因的RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·小鼠心脏RT-PCR产物转化的菌液PCR鉴定 | 第24页 |
| ·阳性克隆菌液PCR产物的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| ·测序及序列比对结果表明获得的基因为CTLA-4基因 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 第二部分小鼠T 淋巴细胞受体CTLA-4基因mRNA的靶点筛选和验证 | 第27-43页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·器材 | 第28页 |
| ·基因及质粒载体 | 第28页 |
| ·生物及化学试剂 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·设计合成寡核苷酸文库 | 第28-29页 |
| ·体外转录 | 第29页 |
| ·CTLA-4基因RNA的固定 | 第29页 |
| ·CTLA-4基因RNA与寡核苷酸文库杂交 | 第29页 |
| ·结合寡核苷酸文库序列的扩增 | 第29-30页 |
| ·结合寡核苷酸文库序列的测定 | 第30页 |
| ·序列比对和靶点的确认 | 第30-31页 |
| ·靶点有效性的体外验证 | 第31-32页 |
| 2 实验结果 | 第32-39页 |
| ·基因转录模板产生 | 第32页 |
| ·体外转录 | 第32-33页 |
| ·RASS技术筛选获得的寡核苷酸文库序列 | 第33-34页 |
| ·RASS获得的CTLA-4 mRNA结合文库序列 | 第34页 |
| ·RASS筛选得到的CTLA-4基因结构靶点和体外验证靶点有效性结果 | 第34-39页 |
| 3 讨论 | 第39-43页 |
| 第三部分小鼠T淋巴细胞受体CTLA-4基因的新型干预分子pRNA引导型Ribozyme的构建和制备 | 第43-60页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·试剂及质粒载体 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-52页 |
| ·165 rRNA-Ribozyme的设计 | 第45页 |
| ·pRNA 顺式连接开放型165 rRNA-Ribozyme分子的制备 | 第45-46页 |
| ·165 rRNA-Ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型分子的制备 | 第46-47页 |
| ·165 rRNA-pRNA-Ribozyme聚合体的形成 | 第47-48页 |
| ·165 rRNA-pRNA-Ribozyme体外对基因mRNA切割活性分析 | 第48页 |
| ·CTLA4-pRNA-Ribozyme的设计与制备 | 第48-50页 |
| ·三靶点CTLA4-pRNA-Ribozyme三聚体的设计与制备 | 第50-51页 |
| ·CTLA4-pRNA-Ribozyme相关引物、序列设计 | 第51页 |
| ·CTLA4-pRNA-Ribozyme体外切割活性分析 | 第51-52页 |
| 2 实验结果 | 第52-57页 |
| ·165 rRNA-Ribozyme的设计 | 第52页 |
| ·165 rRNA-pRNA-Ribozyme顺式开放型结构的设计 | 第52-53页 |
| ·Ribozyme 嵌入闭合型pRNA-Ribozyme结构的设计与制备 | 第53-54页 |
| ·设计和制备的CTLA4-pRNA-Ribozyme | 第54-55页 |
| ·CTLA4/165 rRNA-pRNA-Ribozyme聚合体分析 | 第55-56页 |
| ·CTLA4/165 rRNA-pRNA-Ribozyme体外切割活性分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录1 英文缩略词表 | 第65-66页 |
| 附录2 在学期间研究成果目录 | 第66-67页 |
| 附录3 本人简历 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 综述 | 第69-86页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
