| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 古菌概述 | 第10-12页 |
| 1.2 P-loop NTPase的分类与特点 | 第12-14页 |
| 1.3 同源重组修复途径及Holliday junction解离酶 | 第14-20页 |
| 1.3.1 同源重组修复途径 | 第14-17页 |
| 1.3.2 HJ解离酶介绍 | 第17-20页 |
| 1.4 SisPINA前期研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4.1 SisPINA的发现 | 第20-21页 |
| 1.4.2 SisPINA前期研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5 本论文研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 SisPINA及其突变体蛋白的表达、纯化和结晶 | 第23-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂与主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23页 |
| 2.1.4 主要溶液配方 | 第23-24页 |
| 2.1.5 蛋白的表达与纯化 | 第24-25页 |
| 2.1.6 SisPINA及其突变体蛋白晶体的筛选及优化 | 第25-26页 |
| 2.1.6.1 蛋白晶体形成原理 | 第25页 |
| 2.1.6.2 蛋白晶体初筛 | 第25页 |
| 2.1.6.3 蛋白晶体优化 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-34页 |
| 2.2.1 SisPINA蛋白的表达与纯化 | 第26-29页 |
| 2.2.2 SisPINA蛋白的结晶与优化 | 第29-31页 |
| 2.2.3 SisPINAE323K(1-473)蛋白的表达与纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.4 SisPINAE323K(1-473)蛋白的结晶与优化 | 第33-34页 |
| 2.3 本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 SisPINA保守位点的突变分析 | 第36-48页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-38页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 试剂与主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.3 培养基 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要溶液配方 | 第37页 |
| 3.1.5 SisPINA各突变体重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.6 SisPINA各突变体蛋白的表达与纯化 | 第38页 |
| 3.1.7 ATPase活性检测 | 第38页 |
| 3.2 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.2.1 SisPINA及其同源蛋白同源序列比对 | 第38-40页 |
| 3.2.2 SisPINA各突变体表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.3 SisPINA各突变体蛋白的表达与纯化 | 第41-42页 |
| 3.2.4 SisPINA及其突变体蛋白ATPase活性分析 | 第42-46页 |
| 3.3 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 SisPINA与SisHjc相互作用的体外生化分析 | 第48-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第48页 |
| 4.1.2 试剂与主要仪器设备 | 第48页 |
| 4.1.3 培养基 | 第48页 |
| 4.1.4 SisHjc蛋白表达与纯化 | 第48-49页 |
| 4.1.5 DNA底物的制备 | 第49-50页 |
| 4.1.6 核酸内切酶活性检测原理和方法 | 第50页 |
| 4.2 实验结果 | 第50-55页 |
| 4.2.1 SisHjc表达与纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.2 SisPINA对Hjc解离酶活性的影响 | 第51-53页 |
| 4.2.3 SisPINA突变体对SisHjc解离酶活性的影响 | 第53-55页 |
| 4.3 本章小结 | 第55-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-67页 |
| 附录一: 试剂及耗材 | 第60-61页 |
| 附录二: 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 附录三: 本文所用的PCR引物 | 第62-64页 |
| 附录四: 本文使用和构建重组质粒 | 第64-65页 |
| 附录五: 主要溶液配方 | 第65-66页 |
| 附录六 PCR扩增及双酶切体系 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学论文评阅答辩情况表 | 第72页 |
