| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-41页 |
| 1 植物miRNA | 第16-30页 |
| ·植物miRNA的生物合成 | 第16-18页 |
| ·植物体内miRNA的鉴定及表达分析 | 第18-20页 |
| ·克隆与高通量测序 | 第18-19页 |
| ·生物信息学预测 | 第19页 |
| ·遗传学筛选 | 第19-20页 |
| ·miRNA表达量分析 | 第20页 |
| ·植物miRNA靶基因的识别和鉴定 | 第20-22页 |
| ·植物体内miRNA的功能 | 第22-30页 |
| ·miRNA参与植物生长发育调控 | 第23-24页 |
| ·miRNA参与激素调节与信号转导 | 第24页 |
| ·miRNA参与植物逆境胁迫应答 | 第24-30页 |
| ·抗环境胁迫 | 第25-28页 |
| ·抗营养胁迫 | 第28-30页 |
| ·抗生物胁迫 | 第30页 |
| 2 Cd毒害与植物 | 第30-36页 |
| ·Cd对植物的毒害作用 | 第31-33页 |
| ·Cd影响植物生长 | 第31-32页 |
| ·Cd影响水分吸收和营养平衡 | 第32页 |
| ·Cd影响呼吸作用 | 第32页 |
| ·Cd影响光合作用 | 第32-33页 |
| ·Cd导致氧化胁迫 | 第33页 |
| ·植物对Cd的耐受作用 | 第33-36页 |
| ·限制Cd进入植物体内 | 第34页 |
| ·Cd的螯合和区室化 | 第34-35页 |
| ·激活植物体内抗氧化防御系统 | 第35-36页 |
| ·诱导胁迫蛋白 | 第36页 |
| 3 miRNA在重金属胁迫应答中的作用 | 第36-39页 |
| ·miR398与重金属胁迫 | 第37-38页 |
| ·非必需重金属胁迫相关的miRNA | 第38-39页 |
| 4 研究目的和意义 | 第39-41页 |
| 第二章 Cd胁迫相关miRNA的分离与鉴定 | 第41-59页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-47页 |
| ·水稻幼苗的培养 | 第41页 |
| ·Cd胁迫处理 | 第41页 |
| ·水稻根总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·miRNA芯片实验 | 第42-43页 |
| ·实时定量PCR检测miRNA表达 | 第43-45页 |
| ·半定量RT-PCR检测miRNA前体的表达 | 第45-46页 |
| ·miRNA基因上游启动子的确定以及顺式作用元件分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·miRNA芯片分离获得19个Cd胁迫相关的miRNA | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR和半定量RT-PCR验证miRNA芯片结果 | 第48-51页 |
| ·miRNA基因上游胁迫相关顺式作用元件预测与重金属响应元件分析 | 第51-55页 |
| 3 小结与讨论 | 第55-59页 |
| ·miRNA微阵列芯片鉴定Cd胁迫相关miRNA的优缺点 | 第55-56页 |
| ·Cd胁迫相关miRNA种类 | 第56-57页 |
| ·Cd胁迫相关miRNA的顺式作用元件分析与讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 Cd胁迫相关miRNA靶基因的预测与表达分析 | 第59-70页 |
| 1 材料与方法 | 第59-60页 |
| ·试验材料 | 第59页 |
| ·试验方法 | 第59-60页 |
| ·生物信息学方法预测miRNA的靶基因 | 第59页 |
| ·实时定量PCR检测miRNA靶基因的表达 | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-67页 |
| ·Cd胁迫相关miRNA的靶基因预测分析 | 第60-65页 |
| ·转录因子 | 第61-63页 |
| ·蛋白激酶 | 第63页 |
| ·钙信号分子 | 第63-64页 |
| ·miRNA生物加工或作用中的重要蛋白 | 第64-65页 |
| ·Cd胁迫相关miRNA的靶基因的表达水平检测 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| ·miRNA同时参与植物的生长发育和胁迫应答的调控 | 第67-68页 |
| ·miRNA调控靶基因的复杂性 | 第68-69页 |
| 4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第四章 过表达miR166对水稻Cd胁迫耐受性的影响研究 | 第70-93页 |
| 1 材料与方法 | 第70-81页 |
| ·试验材料 | 第70页 |
| ·试验试剂 | 第70-71页 |
| ·miRNA过表达载体(35S：MIRNA)的构建 | 第71-75页 |
| ·克隆引物设计 | 第71页 |
| ·载体构建流程 | 第71-75页 |
| ·农杆菌转化及农杆菌介导的水稻转基因 | 第75-77页 |
| ·农杆菌感受态的制备与转化 | 第75页 |
| ·农杆菌介导的水稻转基因 | 第75-77页 |
| ·转基因阳性植株的鉴定 | 第77-78页 |
| ·叶片潮霉素筛选 | 第77-78页 |
| ·GUS蛋白的组织化学染色 | 第78页 |
| ·荧光定量PCR鉴定miRNA及其靶基因的表达 | 第78页 |
| ·转基因水稻对Cd胁迫的响应 | 第78-81页 |
| ·Hyg抗性遗传分析 | 第78-79页 |
| ·转基因水稻植株Cd处理表型观察 | 第79-80页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第79页 |
| ·丙二醛含量测定 | 第79页 |
| ·H_2O_2含量测定 | 第79-80页 |
| ·Cd含量测定 | 第80页 |
| ·数据分析 | 第80页 |
| ·转基因水稻种子在Cd处理下的萌发情况 | 第80页 |
| ·转基因水稻干旱处理 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-89页 |
| ·过表达载体35S：MIR166m的构建及在水稻中的遗传转化 | 第81-83页 |
| ·35S：MIRNA转基因植株的鉴定 | 第83-86页 |
| ·转基因水稻的Hyg检测和GUS组织化学活性分析 | 第83-84页 |
| ·转基因水稻中miRNA及其靶基因的表达检测 | 第84-86页 |
| · | 第86-89页 |
| ·过表达miR166提高水稻苗期对Cd胁迫的耐受性 | 第86-88页 |
| ·过表达miR166提高水稻对干旱胁迫的耐受性 | 第88-89页 |
| 3 小结与讨论 | 第89-93页 |
| ·35S：MIRNA过表达载体的构建 | 第90-91页 |
| ·miR166过表达导致水稻对Cd的耐受性增强 | 第91-93页 |
| 第五章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 1 全文结论 | 第93页 |
| 2 创新之处 | 第93-94页 |
| 3 研究展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-116页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第116页 |
