| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 bHLH转录因子研究进展 | 第9-12页 |
| 1.1.1 转录因子概述 | 第9页 |
| 1.1.2 bHLH转录因子的发现和结构特点 | 第9-10页 |
| 1.1.3 bHLH转录因子的生物学功能 | 第10-12页 |
| 1.2 大豆三萜皂苷研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 大豆三萜皂苷的构成和功能 | 第12页 |
| 1.2.2 大豆三萜皂苷的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.2.3 大豆三萜皂苷合成的关键酶 | 第13-14页 |
| 1.3 大豆与根瘤菌的共生固氮系统 | 第14-15页 |
| 1.3.1 共生固氮的意义 | 第14页 |
| 1.3.2 根瘤的形成过程 | 第14页 |
| 1.3.3 结瘤信号传导途径 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究选题依据、目的意义和技术路线 | 第15-17页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第15-16页 |
| 1.4.2 目的意义 | 第16页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第16-17页 |
| 2. 材料和方法 | 第17-27页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 载体、菌株 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 植物材料总RNA提取 | 第17-19页 |
| 2.2.2 RNA反转录为cDNA | 第19页 |
| 2.2.3 bHLH04G、bHLH06G的克隆 | 第19-20页 |
| 2.2.4 PCR产物切胶回收 | 第20页 |
| 2.2.5 胶回收片段连接T-easy载体 | 第20-21页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5ɑ感受态的制备（CaCl2法）和热激转化制备感受态 | 第21-22页 |
| 2.2.7 质粒提取 | 第22页 |
| 2.2.8 含有目的片段的T-easy质粒和终载体pET28a(+)的双酶切、酶连 | 第22-23页 |
| 2.2.9 bHLH04G、bHLH06G基因在大肠杆菌Transetta中诱导表达 | 第23页 |
| 2.2.10 原核表达所需溶液配方 | 第23-24页 |
| 2.2.11 检测蛋白的可溶性 | 第24-25页 |
| 2.2.12 bHLH04G、bHLH06G过表达和RNAi载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.13 农杆菌电击转化感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.14 农杆菌电击转化 | 第26页 |
| 2.2.15 大豆发根转化 | 第26页 |
| 2.2.16 荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.17 大豆皂苷提取 | 第27页 |
| 3. 结果与分析 | 第27-43页 |
| 3.1 bHLH04G蛋白性质分析 | 第27-28页 |
| 3.2 bHLH06G蛋白性质分析 | 第28-29页 |
| 3.3 pET28A(+)-bHLH04G、pET28A(+)-bHLH06G载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.4 pET28a(+)-bHLH04G、pET28a(+)-bHLH06G的原核表达 | 第30-31页 |
| 3.5 pET28a(+)-bHLH04G、pET28a(+)-bHLH06G的可溶性蛋白检测 | 第31-32页 |
| 3.6 pGEX4T1-bHLH04G、pGEX4T1-bHLH06G载体的构建和原核表达 | 第32-33页 |
| 3.7 pGEX4T1-bHLH04G、pGEX4T1-bHLH06G的可溶性蛋白检测 | 第33-34页 |
| 3.8 RNAI载体的构建 | 第34页 |
| 3.9 大豆发根中bHLH04G沉默对结瘤固氮的影响 | 第34-37页 |
| 3.10 大豆发根中bHLH06G沉默对结瘤固氮的影响 | 第37-39页 |
| 3.11 大豆发根中bHLH04G沉默对皂苷合成的影响 | 第39-40页 |
| 3.12 大豆发根中bHLH06G沉默对皂苷生物合成的影响 | 第40-41页 |
| 3.13 大豆发根中AMS沉默对结瘤固氮的影响 | 第41-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
