| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要缩略词 | 第21-22页 |
| 1 绪论 | 第22-43页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第22-23页 |
| 1.2 镉污染对植物的影响 | 第23-31页 |
| 1.2.1 土壤重金属污染 | 第23-24页 |
| 1.2.2 重金属Cd对植物的毒害作用 | 第24-25页 |
| 1.2.3 植物在镉胁迫下降低毒害的耐性机理 | 第25-28页 |
| 1.2.4 植物螯合态金属转运体通过液泡隔离完成重金属解毒 | 第28-29页 |
| 1.2.5 植物对重金属的长距离运输机制 | 第29页 |
| 1.2.6 镉转录调节植物体基因表达 | 第29-31页 |
| 1.3 植物MicroRNAs | 第31-36页 |
| 1.3.1 MIRNA的特点与形成机制 | 第31页 |
| 1.3.2 MIRNA的作用机制 | 第31-32页 |
| 1.3.3 MIRNA对植物逆境胁迫的调控 | 第32-36页 |
| 1.4 植物修复技术与镉超积累植物伴矿景天 | 第36-40页 |
| 1.4.1 伴矿景天的解毒作用机制 | 第36-39页 |
| 1.4.2 重金属吸收效率的优化 | 第39-40页 |
| 1.5 研究内容 | 第40-42页 |
| 1.6 技术路线图 | 第42-43页 |
| 2 拟南芥MIR156过表达、敲除转基因载体构建及表型分析 | 第43-56页 |
| 2.1 引言 | 第43页 |
| 2.2 试验材料 | 第43-46页 |
| 2.2.1 拟南芥材料 | 第43页 |
| 2.2.2 细菌菌株与质粒载体 | 第43页 |
| 2.2.3 酶及生化试剂 | 第43-45页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第45页 |
| 2.2.5 引物序列 | 第45-46页 |
| 2.3 试验方法 | 第46-51页 |
| 2.3.1 目的基因克隆 | 第46-48页 |
| 2.3.2 超表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.3.3 35S::MIR156A及Ubi10::MIM156表达载体的遗传转化 | 第49-50页 |
| 2.3.4 植株表型观察 | 第50-51页 |
| 2.4 结果与分析 | 第51-54页 |
| 2.4.1 目的基因的克隆 | 第51页 |
| 2.4.2 超表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.4.3 35S::MIR156A及Ubi10::MIM156表达载体的遗传转化 | 第52-53页 |
| 2.4.4 WT、35S::MIR156A及Ubi10::MIM156植株表型分析 | 第53-54页 |
| 2.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 3 MIR156调控拟南芥镉胁迫耐受机制研究 | 第56-80页 |
| 3.1 引言 | 第56页 |
| 3.2 试验材料 | 第56-60页 |
| 3.2.1 WT、35S::MIR156A及Ubi10::MIM156材料 | 第56页 |
| 3.2.2 主要试剂及溶液配方 | 第56-59页 |
| 3.2.3 主要仪器和设备 | 第59-60页 |
| 3.3 试验方法 | 第60-65页 |
| 3.3.1 拟南芥水培条件下的镉胁迫处理 | 第60页 |
| 3.3.2 叶绿素含量测定 | 第60-61页 |
| 3.3.3 抗氧化酶活性测定 | 第61-62页 |
| 3.3.4 镉转运子编码基因表达检测 | 第62-65页 |
| 3.4 结果与分析 | 第65-77页 |
| 3.4.1 硫酸镉浓度及处理时间 | 第65-66页 |
| 3.4.2 拟南芥在镉胁迫处理下的损伤表型分级 | 第66-67页 |
| 3.4.3 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A镉胁迫处理下的损伤表型分析 | 第67-68页 |
| 3.4.4 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A镉胁迫处理下的损伤分级统计 | 第68-70页 |
| 3.4.5 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A叶绿素含量的测定 | 第70-71页 |
| 3.4.6 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A的镉吸收积累 | 第71页 |
| 3.4.7 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A在镉胁迫处理下相关生理指标测定 | 第71-73页 |
| 3.4.8 WT、Ubi10::MIM156和35S::MIR156A镉转运相关基因的表达差异 | 第73-76页 |
| 3.4.9 MIR156调控拟南芥根系发育及与镉吸收相关性分析 | 第76-77页 |
| 3.5 本章小结 | 第77-80页 |
| 4 伴矿景天再生体系的建立 | 第80-89页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 试验材料 | 第80-81页 |
| 4.2.1 伴矿景天材料 | 第80-81页 |
| 4.2.2 主要仪器及试剂 | 第81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-82页 |
| 4.3.1 培养条件 | 第81页 |
| 4.3.2 统计方法 | 第81页 |
| 4.3.3 愈伤组织的诱导 | 第81-82页 |
| 4.3.4 愈伤组织增殖培养 | 第82页 |
| 4.3.5 愈伤组织分化 | 第82页 |
| 4.3.6 芽的增殖培养 | 第82页 |
| 4.3.7 生根及壮苗培养 | 第82页 |
| 4.4 结果与分析 | 第82-87页 |
| 4.4.1 愈伤组织的诱导和增殖 | 第82-84页 |
| 4.4.2 愈伤组织芽的诱导 | 第84-85页 |
| 4.4.3 芽的增殖培养 | 第85-86页 |
| 4.4.4 生根及壮苗培养 | 第86-87页 |
| 4.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 5 MIR156影响伴矿景天对Cd的耐受性 | 第89-107页 |
| 5.1 引言 | 第89页 |
| 5.2 试验材料 | 第89-91页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第89页 |
| 5.2.2 质粒表达载体与菌株 | 第89-90页 |
| 5.2.3 酶及生化试剂 | 第90页 |
| 5.2.4 引物序列 | 第90页 |
| 5.2.5 主要仪器及和设备 | 第90-91页 |
| 5.3 试验方法 | 第91-96页 |
| 5.3.1 目的基因的克隆 | 第91-92页 |
| 5.3.2 植物表达载体的构建 | 第92页 |
| 5.3.3 伴矿景天遗传转化中抗生素的敏感性实验 | 第92-93页 |
| 5.3.4 伴矿景天转基因 | 第93-96页 |
| 5.3.5 Cd处理转基因伴矿景天愈伤组织 | 第96页 |
| 5.4 结果与分析 | 第96-104页 |
| 5.4.1 拟南芥MIR156a和MIM156的克隆 | 第96-97页 |
| 5.4.2 植物表达载体构建 | 第97-100页 |
| 5.4.3 卡那霉素和G418对伴矿景天愈伤组织生长的影响 | 第100-102页 |
| 5.4.4 伴矿景天转基因 | 第102-103页 |
| 5.4.5 Cd处理转基因伴矿景天愈伤组织 | 第103-104页 |
| 5.5 本章小结 | 第104-107页 |
| 6 结论与展望 | 第107-110页 |
| 6.1 主要结论 | 第107-108页 |
| 6.2 主要创新点 | 第108页 |
| 6.3 展望 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第127-128页 |
