| 摘要 | 第5-9页 |
| abstract | 第9-12页 |
| 英文缩略词 | 第21-23页 |
| 第1章 绪论 | 第23-30页 |
| 1.1 张应变与VSMCs的分化 | 第24-26页 |
| 1.1.1 影响VSMCs分化的因素 | 第24-25页 |
| 1.1.2 张应变影响VSMCs分化的意义 | 第25-26页 |
| 1.2 张应变对VSMCs BK通道的影响 | 第26-27页 |
| 1.2.1 张应变与VSMCs BK通道的力敏感 | 第26-27页 |
| 1.2.2 VSMCs BK通道力敏感变化的意义 | 第27页 |
| 1.3 BK通道影响VSMCs分化功能的作用和机制 | 第27-28页 |
| 1.3.1 BK通道广泛参与调控细胞功能 | 第27页 |
| 1.3.2 病理性张应变促进BK通道力敏感剪接并诱导VSMCs去分化 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究的内容和意义 | 第28-30页 |
| 第2章 材料和方法 | 第30-51页 |
| 2.1 细胞培养 | 第30-33页 |
| 2.1.1 VSMCs的培养 | 第30-32页 |
| 2.1.2 HEK cells的培养 | 第32页 |
| 2.1.3 细胞冻存与复苏 | 第32-33页 |
| 2.2 细胞力学加载 | 第33-36页 |
| 2.2.1 FXTM-4000T细胞张应变加载系统 | 第33-34页 |
| 2.2.2 细胞水平张应变加载装置 | 第34-36页 |
| 2.3 药物刺激 | 第36-37页 |
| 2.3.1 所用试剂 | 第36-37页 |
| 2.3.2 操作步骤 | 第37页 |
| 2.4 RNA干扰 | 第37-38页 |
| 2.4.1 si RNA的合成 | 第37-38页 |
| 2.4.2 实验分组 | 第38页 |
| 2.4.3 操作步骤 | 第38页 |
| 2.5 质粒转染 | 第38-41页 |
| 2.5.1 质粒扩增及提取 | 第38-40页 |
| 2.5.2 VSMCs转染 | 第40页 |
| 2.5.3 HEK cells转染 | 第40-41页 |
| 2.6 膜片钳 | 第41-43页 |
| 2.6.1 玻璃微管电极的制备 | 第41页 |
| 2.6.2 单通道内膜向外记录（single channels inside-out model） | 第41-42页 |
| 2.6.3 全细胞记录（whole-cell model） | 第42-43页 |
| 2.6.4 数据分析 | 第43页 |
| 2.7 钙成像（calcium imaging） | 第43-45页 |
| 2.7.1 溶液配制 | 第43页 |
| 2.7.2 VSMCs钙成像 | 第43-44页 |
| 2.7.3 HEK cells钙成像 | 第44-45页 |
| 2.8 蛋白免疫印迹（western blotting） | 第45-46页 |
| 2.8.1 溶液配制 | 第45页 |
| 2.8.2 操作步骤 | 第45-46页 |
| 2.9 实时定量荧光PCR | 第46-48页 |
| 2.9.1 RNA的提取(TRIzol法) | 第46-47页 |
| 2.9.2 RNA逆转录 | 第47页 |
| 2.9.3 RT-PCR | 第47-48页 |
| 2.10 免疫荧光染色 | 第48-49页 |
| 2.10.1 BKα 亚基染色 | 第48-49页 |
| 2.10.2 F-actin染色 | 第49页 |
| 2.11 划痕实验 | 第49页 |
| 2.11.1 所用试剂 | 第49页 |
| 2.11.2 实验分组 | 第49页 |
| 2.11.3 操作步骤 | 第49页 |
| 2.12 统计分析 | 第49-51页 |
| 第3章 实验结果 | 第51-84页 |
| 3.1 张应变对VSMCs分化和细胞内钙振荡的影响 | 第51-53页 |
| 3.1.1 15%张应变诱导VSMCs去分化 | 第51-52页 |
| 3.1.2 15%张应变促进细胞内钙振荡 | 第52-53页 |
| 3.2 张应变对VSMCs BK通道的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.1 15%张应变抑制VSMCsBK通道α亚基表达 | 第53-54页 |
| 3.2.2 15%张应变促进VSMCs的BK通道激活 | 第54-55页 |
| 3.3 张应变通过BK通道影响VSMCs分化 | 第55-59页 |
| 3.3.1 抑制BK通道活性促进细胞内钙振荡 | 第55页 |
| 3.3.2 BK通道活性的增加促进VSMCs分化指标的蛋白表达 | 第55-56页 |
| 3.3.3 BK通道活性的增加抑制VSMCs迁移 | 第56-57页 |
| 3.3.4 过表达BK通道促进VSMCs分化指标蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 3.4 张应变促进BK通道选择性剪接，影响BK通道力敏感 | 第59-70页 |
| 3.4.1 15%张应变促进VSMCs的BK通道 α 亚基STREX剪接 | 第59-60页 |
| 3.4.2 HEK cells转染BK通道质粒后的电流变化 | 第60-62页 |
| 3.4.3 相同钳制电压条件下，随着钙浓度增加HEK-Slo的BK通道显著激活 | 第62-64页 |
| 3.4.4 相同钙浓度条件下，随着钳制电压增加HEK-Slo的BK通道显著激活 | 第64-67页 |
| 3.4.5 相同钙浓度及相同钳制电压条件下，15%张应变促进HEK-Slo的BK通道激活 | 第67-70页 |
| 3.5 张应变调控ER stress影响BK通道STREX剪接 | 第70-77页 |
| 3.5.1 15%张应变促进VSMCs的xbp1激活 | 第70-71页 |
| 3.5.2 ER stress模型的建立 | 第71-72页 |
| 3.5.3 ER stress促进BK通道 α 亚基STREX剪接，抑制VSMCs的BK通道 α亚基表达 | 第72-75页 |
| 3.5.4 降低xbp1后，抑制BK通道 α 亚基STREX剪接，促进VSMCs的BK通道 α 亚基表达 | 第75-77页 |
| 3.6 ER stress促进VSMCs去分化 | 第77-80页 |
| 3.6.1 ER stress抑制VSMCs分化指标的蛋白表达 | 第77-79页 |
| 3.6.2 降低xbp1后促进VSMCs分化指标的蛋白表达 | 第79-80页 |
| 3.7 细胞外钙在病理性张应变诱导VSMCs去分化中的作用 | 第80-84页 |
| 3.7.1 无钙培养基条件下，VSMCs的钙振荡减少 | 第80-81页 |
| 3.7.2 无钙培养基条件下，不同张应变对VSMCs BK通道 α 亚基及分化指标的影响 | 第81页 |
| 3.7.3 无钙培养基条件下，ER stress抑制VSMCs BK通道 α 亚基表达 | 第81-82页 |
| 3.7.4 无钙培养基条件下，ER stress抑制VSMCs分化指标的蛋白表达 | 第82-84页 |
| 第4章 讨论 | 第84-93页 |
| 4.1 BK通道参与化学因素和力学因素诱导的VSMCs功能变化 | 第85-86页 |
| 4.2 病理性张应变促进BK通道力敏感剪接 | 第86-87页 |
| 4.3 病理性张应变促进BK通道力敏感剪接的机制 | 第87-88页 |
| 4.4 BK通道STREX剪接影响细胞内钙变化 | 第88-89页 |
| 4.5 BK通道参与病理性张应变诱导的VSMCs去分化 | 第89-93页 |
| 全文小结 | 第93-94页 |
| 文献综述 | 第94-111页 |
| 参考文献 | 第111-124页 |
| 附录 | 第124-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 攻读博士学位期间已发表的学术论文 | 第129页 |
