| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 L-丝氨酸的基本性质及用途 | 第10-11页 |
| 1.1.1 L-丝氨酸的基本性质 | 第10页 |
| 1.1.2 L-丝氨酸的用途 | 第10-11页 |
| 1.2 L-丝氨酸的代谢 | 第11-15页 |
| 1.2.1 L-丝氨酸的合成代谢 | 第12-13页 |
| 1.2.2 糖酵解途径对L-丝氨酸合成途径的影响 | 第13页 |
| 1.2.3 L-丝氨酸的分解代谢 | 第13-14页 |
| 1.2.4 L-丝氨酸的运输 | 第14-15页 |
| 1.3 微生物生产L-丝氨酸的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.3.1 甲基营养菌L-丝氨酸的生产 | 第15-16页 |
| 1.3.2 谷氨酸棒状杆菌生产L-丝氨酸的研究现状 | 第16页 |
| 1.3.3 大肠杆菌生产L-丝氨酸的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.4 提高大肠杆菌K-12 菌株L-丝氨酸生物合成的策略 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题的研究内容与意义 | 第19-21页 |
| 1.5.1 本课题的研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 本课题的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-29页 |
| 2.1.1 实验菌株及质粒 | 第21-23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第25-27页 |
| 2.1.5 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.6 3-磷酸甘油酸脱氢酶酶活测定溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 谷氨酸棒状杆菌和大肠杆菌基因组的提取 | 第29页 |
| 2.2.2 PCR基因扩增 | 第29-32页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.4 DNA片段回收 | 第33-34页 |
| 2.2.5 DNA片段回收 | 第34-35页 |
| 2.2.6 大肠杆菌化转感受态的制备与转化 | 第35-36页 |
| 2.2.7 大肠杆菌电转感受态的制备与转化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.9 目的基因的敲除与过表达 | 第38-40页 |
| 2.2.10 细菌的培养与发酵 | 第40-41页 |
| 2.2.11 发酵过程中菌体浓度、葡萄糖浓度、氨基酸以及副产物的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.12 3-磷酸甘油酸脱氢酶活性的测定[9] | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第43-70页 |
| 3.1 L-丝氨酸降解途径的敲除 | 第43-48页 |
| 3.1.1 甘氨酸裂解系统的过表达 | 第43-44页 |
| 3.1.2 glyA基因的敲除 | 第44-47页 |
| 3.1.3 苏氨酸到甘氨酸途径的过表达 | 第47-48页 |
| 3.2 L-丝氨酸上游合成路径的加强 | 第48-52页 |
| 3.2.1 以p20C为载体构建过表达L-丝氨酸合成路径的质粒 | 第48-49页 |
| 3.2.2 serA基因的替换 | 第49-52页 |
| 3.3 L-丝氨酸竞争途径的弱化 | 第52-56页 |
| 3.3.1 gpmA基因的敲除 | 第53-55页 |
| 3.3.2 pykF基因的无痕敲除 | 第55-56页 |
| 3.4 葡萄糖运输途径的优化 | 第56-58页 |
| 3.4.1 ptsHIcrr的无痕敲除 | 第56-57页 |
| 3.4.2 galP基因的过表达 | 第57-58页 |
| 3.5 L-丝氨酸合成路径基因的染色体重组 | 第58-59页 |
| 3.6 工程菌株的发酵表征 | 第59-68页 |
| 3.6.1 L-丝氨酸裂解路径敲除菌株的发酵表征及质粒对L-丝氨酸积累的影响 | 第59-62页 |
| 3.6.2 脱敏型谷氨酸棒状杆菌serA△197基因替换工程菌株的发酵表征 | 第62-63页 |
| 3.6.3 L-丝氨酸竞争途径弱化工程菌株的发酵表征 | 第63-65页 |
| 3.6.4 葡萄糖运输系统的改善对L-丝氨酸产量的影响 | 第65-66页 |
| 3.6.5 L-丝氨酸合成路径基因插入工程菌株的发酵表征 | 第66-68页 |
| 3.7 工程菌株的流加发酵 | 第68-70页 |
| 第四章 结论与展望 | 第70-73页 |
| 4.1 结论 | 第70-71页 |
| 4.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
