| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 中英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1. PD治疗现状和抗氧化剂 | 第11-13页 |
| 2. 定点突变技术与SOD蛋白分子改造 | 第13-16页 |
| 3. PEP-1 和蛋白转导域 (PTDs) | 第16页 |
| 4. MPP~+与帕金森病 | 第16-17页 |
| 5. 课题思路 | 第17-18页 |
| 6. 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 hSOD2突变体的设计、构建和筛选 | 第19-34页 |
| 1. 前言 | 第19页 |
| 2. 实验仪器和材料 | 第19-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.2 实验仪器 | 第21页 |
| 3. 实验方法 | 第21-25页 |
| 3.1 引物设计 | 第21页 |
| 3.2 突变位点的选取 | 第21-22页 |
| 3.3 hSOD2突变体质粒的构建及鉴定 | 第22-24页 |
| 3.4 比较表达hSOD2突变体蛋白E. coli百草枯抗性法初筛突变体活力 | 第24-25页 |
| 4. 实验结果 | 第25-31页 |
| 4.1 突变位点的选取 | 第25-28页 |
| 4.2 hSOD2突变表达载体的获取 | 第28-30页 |
| 4.3 hSOD2突变体的活力初筛 | 第30-31页 |
| 5. 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 hSOD2 K29R突变体酶学性质分析 | 第34-48页 |
| 1. 前言 | 第34页 |
| 2. 实验仪器和材料 | 第34-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3. 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.1 蛋白表达和纯化 | 第36-37页 |
| 3.2 同源建模法模拟突变体蛋白的三维结构 | 第37页 |
| 3.3 突变体蛋白Mn~(2+)结合能力测定 | 第37页 |
| 3.4 SOD活力检测 | 第37-38页 |
| 3.5 温度对突变体蛋白活力影响测定 | 第38页 |
| 3.6 pH对突变体蛋白活力影响测定 | 第38-39页 |
| 3.7 变性剂SDS对突变体蛋白活力影响测定 | 第39页 |
| 4. 实验结果 | 第39-46页 |
| 4.1 蛋白表达和纯化 | 第39-41页 |
| 4.2 突变体蛋白Mn~(2+)结合能力测定 | 第41-42页 |
| 4.3 突变体蛋白三维建模和分析 | 第42-44页 |
| 4.4 温度对突变体蛋白活力影响 | 第44页 |
| 4.5 SDS变性剂对突变体蛋白活力影响 | 第44-45页 |
| 4.6 pH对突变体蛋白活力影响 | 第45-46页 |
| 5. 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 融合蛋白表达和纯化 | 第48-62页 |
| 1. 前言 | 第48页 |
| 2. 实验仪器和材料 | 第48-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 2.2 实验仪器 | 第49页 |
| 3. 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.1 外源片段的PCR扩增 | 第49-50页 |
| 3.2 外源片段的酶切 | 第50-51页 |
| 3.3 pET-28a表达载体的制备 | 第51页 |
| 3.4 pET-28a表达载体与外源片段连接 | 第51-52页 |
| 3.5 突变体蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 3.6 蛋白的纯化 | 第53页 |
| 3.7 蛋白的活力测定 | 第53页 |
| 4. 实验结果 | 第53-60页 |
| 4.1 外源片段的制备 | 第53-54页 |
| 4.2 pET-28a表达载体的制备 | 第54-55页 |
| 4.3 pET-28a表达载体与外源片段连接 | 第55-57页 |
| 4.4 融合蛋白的表达和纯化 | 第57-60页 |
| 5. 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 PEP1MIT-hSOD2 K29R突变体抗帕金森病作用研究 | 第62-78页 |
| 1. 前言 | 第62页 |
| 2. 实验仪器和材料 | 第62-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第62-64页 |
| 2.2 主要仪器 | 第64页 |
| 3. 实验方法 | 第64-68页 |
| 3.1 细胞培养 | 第64页 |
| 3.2 MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞体外PD模型 | 第64-65页 |
| 3.3 检测PEP1MIT-hSOD2 K29R对MPP~+急性损伤SH-SY5Y细胞的保护作用 | 第65页 |
| 3.4 检测PEP1MIT-hSOD2 K29R对SH-SY5Y细胞的毒性 | 第65页 |
| 3.5 免疫荧光染色检测PEP1MIT-hSOD2 K29R融合蛋白在SH-SY5Y细胞中的定位 | 第65-66页 |
| 3.6 PEP1MIT-hSOD2K29R对MPP~+急性损伤SH-SY5Y细胞ROS水平的影响 | 第66页 |
| 3.7 Real-time PCR检测PEP1MIT-hSOD2 K29R对MPP~+急性损伤SH-SY5Y细胞炎症因子和凋亡因子的影响 | 第66-68页 |
| 4. 实验结果 | 第68-76页 |
| 4.1 MTT法建立MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞体外PD模型 | 第68-69页 |
| 4.2 MTT法检测PEP1MIT-hSOD2 K29R对MPP~+急性损伤SH-SY5Y细胞的保护作用 | 第69-70页 |
| 4.3 MTT法检测PEP1MIT-hSOD2 K29R对SH-SY5Y细胞的保护作用 | 第70-71页 |
| 4.4 免疫荧光染色检测PEP1MIT-hSOD2 K29R融合蛋白在SH-SY5Y细胞中的定位 | 第71-72页 |
| 4.5 PEP1MIT-hSOD2 K29R降低MPP~+急性损伤引起SH-SY5Y细胞ROS升高 | 第72-74页 |
| 4.6 PEP1MIT-hSOD2 K29R抑制MPP~+引起的SH-SY5Y细胞炎症 | 第74-75页 |
| 4.7 PEP-MIT1hSOD2 K29R抑制MPP~+引起的SH-SY5Y细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 5. 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 附录 | 第85-89页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
