| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 水稻耐冷机理研究进展 | 第9-10页 |
| 1.1.1 冷害与水稻生产 | 第9页 |
| 1.1.2 水稻冷害的类型 | 第9页 |
| 1.1.3 水稻耐冷性生理研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2 RuBisCO在逆境胁迫中的作用 | 第10-11页 |
| 1.2.1 RuBisCO的结构及功能 | 第10-11页 |
| 1.2.2 OsRBCS基因在植物抗逆中的应用 | 第11页 |
| 1.3 抗性标记基因hpt在水稻中的应用 | 第11-12页 |
| 1.4 基因编辑技术研究进展 | 第12-16页 |
| 1.4.1 ZFN基因组编辑技术 | 第13页 |
| 1.4.2 TALENs基因组编辑技术 | 第13-14页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas基因组编辑技术 | 第14-16页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 主要菌株及质粒 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-38页 |
| 2.2.1 水稻空育131耐冷候选基因的确定 | 第18-21页 |
| 2.2.2 水稻OsRBCS3基因的克隆及分析 | 第21-24页 |
| 2.2.3 水稻空育 131 OSRBCS3基因超量表达及敲除载体构建 | 第24-29页 |
| 2.2.4 根瘤农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第29-32页 |
| 2.2.5 T_0代水稻检测鉴定 | 第32-36页 |
| 2.2.6 T_1代水稻检测鉴定 | 第36-38页 |
| 第3章 结果与分析 | 第38-67页 |
| 3.1 水稻空育131耐冷候选基因 | 第38-41页 |
| 3.1.1 低温胁迫下水稻总RNA提取及cDNA合成 | 第38-39页 |
| 3.1.2 水稻OsRBCS3基因对低温胁迫的响应 | 第39-41页 |
| 3.2 水稻OsRBCS3基因克隆及分析 | 第41-47页 |
| 3.2.1 水稻OsRBCS3基因全长的扩增 | 第41-43页 |
| 3.2.2 水稻OsRBCS3基因入门载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.3 水稻OsRBCS3基因DNA序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3 空育 131 OsRBCS3基因超量表达及敲除载体的构建 | 第47-54页 |
| 3.3.1 超量表达载体 | 第47-51页 |
| 3.3.2 CRISPR/Cas9敲除载体 | 第51-54页 |
| 3.4 空育 131 OsRBCS3基因对水稻的遗传转化 | 第54-58页 |
| 3.4.1 根瘤农杆菌转化子的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.2 水稻成熟胚愈伤组织诱导 | 第55页 |
| 3.4.3 水稻遗传转化体系 | 第55-57页 |
| 3.4.4 遗传转化水稻的获得 | 第57-58页 |
| 3.5 T_0代水稻检测鉴定 | 第58-64页 |
| 3.5.1 外源基因PCR检测 | 第58-59页 |
| 3.5.2 潮霉素基因表达 | 第59-61页 |
| 3.5.3 CRISPR/Cas9靶点编辑情况 | 第61-63页 |
| 3.5.4 水稻孕穗期耐冷性 | 第63-64页 |
| 3.6 T_1代水稻检测鉴定 | 第64-67页 |
| 3.6.1 CRISPR/Cas9靶点编辑情况 | 第64页 |
| 3.6.2 水稻OsRBCS3基因的mRNA表达量 | 第64-65页 |
| 3.6.3 水稻苗期耐冷性 | 第65-67页 |
| 第4章 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 水稻耐冷响应基因的选择 | 第67页 |
| 4.2 遗传转化体系的优化 | 第67-68页 |
| 4.3 潮霉素筛选方法的探究 | 第68-69页 |
| 4.4 CRISPR-CRISPR/Cas9基因编辑系统在水稻中的应用 | 第69-70页 |
| 4.5 耐冷候选基因OsRBCS3的功能验证 | 第70页 |
| 4.6 下一步的工作展望 | 第70-71页 |
| 第5章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 1 培养基及试剂的配制 | 第81-85页 |
| 附录 2 CTAB法提取植物总DNA | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
