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萘促进荧光假单胞菌LZ-4还原六价铬的机理探索及相关萘降解蛋白的纯化和结晶

摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 引言第9-14页
    1.1 多环芳烃的性质及污染性第9页
    1.2 多环芳烃——萘的降解机理分析第9-11页
    1.3 铬的性质及污染性和毒性第11-12页
    1.4 可还原六价铬的微生物第12-13页
    1.5 可还原六价铬的相关酶第13页
    1.6 在微生物中六价铬铬还原的机理第13-14页
    1.7 本次研究的立题依据及研究目的第14页
第二章 材料和方法第14-21页
    2.1 土样的采集第14-15页
    2.2 筛选,富集及生长培养基的配置第15页
    2.3 菌株的富集及筛选第15-16页
    2.4 单菌株的再培养第16页
    2.5 单菌株的鉴定及生理生化特性的测性第16页
        2.5.1 单菌株的形态及生理生化测定第16页
        2.5.2 单菌株的16S rRNA测序及系统发育树的构建第16页
    2.6 LZ-4号菌株的Cr6+的还原实验第16-17页
    2.7 电子供体实验和化学反应实验第17页
        2.7.1 电子供体实验第17页
        2.7.2 化学反应实验第17页
    2.8 铬含量的检测以及利用高效液相色谱(HPLC)检测萘的降解第17-18页
        2.8.1 铬含量的检测方法及步骤第17页
        2.8.2 萘含量的检测第17-18页
    2.9 LZ-4号菌株全基因组的测序和功能基因的注释第18页
        2.9.1 LZ-4号菌株的基因组DNA的提取第18页
        2.9.2 LZ-4号菌株的全基因组测序及基因注释第18页
    2.10 Nah E蛋白和Nah G蛋白的纯化和结晶第18-20页
        2.10.1 Nah E和Nah G表达载体的构建第18页
        2.10.2 His_6-Nah E和Nah G-His_6蛋白的表达第18-19页
        2.10.3 His_6-Nah E和Nah G-His_6蛋白的纯化第19页
        2.10.4 His_6-Nah E和Nah G-His_6蛋白的结晶第19页
        2.10.5 Nah E蛋白的结晶数据收集第19-20页
    2.11 Nah G蛋白还原Cr6+的相关实验第20页
        2.11.1 Nah G蛋白促进大肠杆菌还原Cr6~+实验第20页
        2.11.2 Nah G蛋白酶活还原Cr6~+实验第20页
    2.12 实时定量PCR检测nahG基因的表达情况第20-21页
        2.12.1 LZ-4号菌株的总RNA的提取第20页
        2.12.2 实时定量PCR第20-21页
第三章 结果第21-37页
    3.1 萘降解及铬抗性菌的富集及分离第21页
    3.2 LZ-4号菌株的进化分析及表型特征分析第21-23页
    3.3 LZ-4号菌株还原Cr6+的相关实验第23-25页
        3.3.1 LZ-4号菌株在以萘和葡萄糖分别为碳源的BH培养基中生长情况第23页
        3.3.2 LZ-4号菌株利用不同碳源还原200μ M Cr6~+的能力第23-24页
        3.3.3 LZ-4号菌株利用不同碳源还原500μM Cr~(6+)的能力第24页
        3.3.4 LZ-4号菌株利用不同碳源还原1mM Cr~(6+)的能力第24-25页
    3.4 LZ-4号菌株的萘降解情况第25-26页
    3.5 不同电子供体与铬还原的关系第26-28页
        3.5.1 不同中间产物与Cr~(6+)的化学反应第26-27页
        3.5.2 电子供体对LZ-4号菌株还原的Cr~(6+)影响第27-28页
    3.6 LZ-4号菌的全基因组测序第28-30页
    3.7 萘降解相关蛋白的表达与纯化第30-35页
        3.7.1 Nah E蛋白的纯化,表达及结晶第30-33页
        3.7.2 Nah G蛋白的纯化,表达及结晶第33-35页
    3.8 Nah G蛋白还原Cr6+第35-37页
        3.8.1 NahG蛋白还原Cr~(6+)的酶活实验第35-36页
        3.8.2 Nah G蛋白促进大肠杆菌还原Cr~(6+)实验第36-37页
第四章 讨论第37-43页
第五章 结论第43页
第六章 硕士期间完成的其它课题(已发表)第43-51页
    6.1 研究课题第43页
    6.2 研究背景第43-45页
        6.2.1 硫酸盐还原菌背景介绍第43-44页
        6.2.2 Desulfovibrio vulgaris Hildenborough的背景介绍第44页
        6.2.3 Desulfovibrio vulgaris Hildenborough对电子供体的选择性第44-45页
        6.2.4 本课题的立体依据和方法第45页
    6.3 实验方法及材料第45-47页
        6.3.1 菌株和培养基第45页
        6.3.2 连续培养发生器第45-46页
        6.3.3 细菌生长,氢气和乳酸消耗的分析第46-47页
    6.4 实验结果第47-49页
        6.4.1 乳酸作为单独电子供体第47-48页
        6.4.2 氢气作为唯一的电子供体第48页
        6.4.3 乳酸与氢气共同作为电子供体第48-49页
    6.5 实验讨论第49-51页
参考文献第51-60页
致谢第60-61页
在学期间的研究成果第61页

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