| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 引言 | 第7-19页 |
| 1.1 蛋白质的结构与功能关系 | 第7-8页 |
| 1.2 碳—碳键水解酶 | 第8-15页 |
| 1.2.1 α/β hydrolase-fold | 第8-10页 |
| 1.2.2 碳—碳键水解酶 | 第10-15页 |
| 1.2.3 非α/β hydrolase-fold的碳—碳键水解酶 | 第15页 |
| 1.3 根皮素的生物学背景 | 第15-16页 |
| 1.4 根皮素水解酶的研究现状 | 第16页 |
| 1.5 蛋白结晶的基本原理 | 第16-19页 |
| 1.5.1 蛋白晶体的生长过程 | 第16-18页 |
| 1.5.2 晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-52页 |
| 2.1 构建重组质粒 | 第19-23页 |
| 2.1.1 mPhlG核酸序列全基因合成及亚克隆 | 第19-23页 |
| 2.2 His6-mPhlG的表达和纯化 | 第23-26页 |
| 2.2.1 His6-mPhlG的表达 | 第23页 |
| 2.2.2 His6-mPhlG的纯化 | 第23-26页 |
| 2.2.2.1 细胞破碎 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 镍柱亲和层析 | 第24-25页 |
| 2.2.2.3 分子筛纯化 | 第25页 |
| 2.2.2.4 浓缩及浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.3 mPhlG的晶体初筛及优化 | 第26-41页 |
| 2.3.1 mPhlG的手工初筛 | 第26-28页 |
| 2.3.2 Index 85条件mPhlG晶体的数据收集 | 第28-29页 |
| 2.3.3 mPhlG晶体的初步优化 | 第29-33页 |
| 2.3.3.1 Seeding法优化蛋白晶体 | 第30-32页 |
| 2.3.3.2 Seeding法优化Index 66和Index 85条件mPhlG晶体 | 第32-33页 |
| 2.3.3.3 ～Index 66条件mPhlG晶体的数据收集 | 第33页 |
| 2.3.4 mPhlG的机器人初筛 | 第33-36页 |
| 2.3.5 mPhlG机筛条件的优化 | 第36-39页 |
| 2.3.6 ～Grid186条件mPhlG晶体的进一步优化 | 第39-41页 |
| 2.4 mPhlG水解底物的鉴定 | 第41-43页 |
| 2.5 mPhlG的酶活参数测定 | 第43-49页 |
| 2.5.1 监测底物最适波长的确定 | 第43页 |
| 2.5.2 酶活体系的确定 | 第43-49页 |
| 2.5.2.1 反应pH值的确定 | 第43页 |
| 2.5.2.2 反应温度的确定 | 第43-44页 |
| 2.5.2.3 反应酶浓度的确定 | 第44-49页 |
| 2.5.3 mPhIG水解MAPG的酶活参数测定 | 第49页 |
| 2.5.4 mPhIG水解Phloretin的酶活参数测定 | 第49页 |
| 2.6 mPhIG与底物的分子对接模型 | 第49页 |
| 2.7 mPhIG定点突变体的构建 | 第49-51页 |
| 2.8 蛋白质的化学交联 | 第51-52页 |
| 第三章 结论 | 第52-62页 |
| 3.1 mPhIG的表达与纯化 | 第52页 |
| 3.2 mPhIG的化学交联 | 第52-53页 |
| 3.3 mPhIG模型的质量评估 | 第53-55页 |
| 3.4 mPhIG的整体结构 | 第55页 |
| 3.5 mPhIG单体的拓扑结构和金属结合位点 | 第55-57页 |
| 3.6 mPhIG的结构与序列比对 | 第57-58页 |
| 3.7 mPhIG与底物Phloretin的分子对接模型 | 第58-59页 |
| 3.8 mPhIG的水解酶活性及活性位点分析 | 第59-61页 |
| 3.8.1 mPhIG的酶活参数 | 第59-60页 |
| 3.8.2 mPhIG的活性位点分析 | 第60-61页 |
| 3.9 mPhIG突变体-Phloretin共结晶的尝试 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-81页 |
| 在学期间的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
