| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 油桐简介 | 第12页 |
| 1.2 油桐在国内的研究状况 | 第12-13页 |
| 1.3 油桐在国外的研究状况 | 第13-14页 |
| 1.4 植物脂肪酸研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4.1 植物脂肪酸的种类 | 第14-15页 |
| 1.4.2 植物脂肪酸的作用 | 第15页 |
| 1.4.3 植物油脂的合成 | 第15-17页 |
| 1.4.4 植物脂肪酸的p-氧化 | 第17页 |
| 1.5 长链脂酰辅酶A合成酶(LACS)研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 长链脂酰辅酶A合成酶在脂肪酸合成和分解中的作用 | 第18页 |
| 1.5.2 长链脂酰辅酶A合成酶国内外研究状况 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的意义、技术路线 | 第19-21页 |
| 2 油桐LACS基因的cDNA克隆及生物信息学分析 | 第21-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒载体与菌株 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第22页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 油桐种子总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 反转录 | 第23-24页 |
| 2.2.3 油桐LACS基因的序列查找 | 第24页 |
| 2.2.4 油桐LACS基因克隆引物设计 | 第24页 |
| 2.2.5 扩增体系和程序 | 第24-25页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的回收 | 第25-26页 |
| 2.2.7 DNA回收产物的连接和重组子转化 | 第26-27页 |
| 2.2.8 菌液检测筛选阳性克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.9 基因生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-47页 |
| 2.3.1 油桐总RNA的提取和反转录模板的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.2 油桐LACS1基因的cDNA克隆和生物信息学分析 | 第29-35页 |
| 2.3.3 油桐LACS4基因的cDNA克隆和生物信息学分析 | 第35-41页 |
| 2.3.4 油桐LACS8基因的cDNA克隆和生物信息学分析 | 第41-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3 油桐LACS基因的基因组DNA克隆 | 第48-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.1.2 酶和试剂 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 提取油桐基因组DNA | 第48-49页 |
| 3.2.2 查找油桐LACS基因组 | 第49页 |
| 3.2.3 LACS基因组扩增引物设计 | 第49页 |
| 3.2.4 PCR扩增体系和程序 | 第49-50页 |
| 3.2.5 基因组DNA分段引物设计 | 第50-51页 |
| 3.2.6 基因组DNA扩增体系和程序 | 第51-52页 |
| 3.2.7 产物的回收、连接转化和测序 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-55页 |
| 3.3.1 油桐基因组提取结果 | 第52页 |
| 3.3.2 LACS1和LACS8基因组扩增结果 | 第52-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 4 油桐LACS基因的时空表达及油脂积累相关性分析 | 第56-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 植物样品 | 第56页 |
| 4.1.2 酶与试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-62页 |
| 4.2.1 RNA的提取及荧光定量模板的制备 | 第57-58页 |
| 4.2.2 内参基因筛选 | 第58页 |
| 4.2.3 基因特异引物设计 | 第58-59页 |
| 4.2.4 荧光定量目的基因片段的获得 | 第59-60页 |
| 4.2.5 标准曲线的制作 | 第60-61页 |
| 4.2.6 荧光定量结果分析 | 第61页 |
| 4.2.7 油桐不同发育时期种子油脂提取 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-69页 |
| 4.3.1 荧光定量引物特异性PCR检测 | 第62页 |
| 4.3.2 标准曲线的制备 | 第62-64页 |
| 4.3.3 油桐LACS基因的时空表达分析 | 第64-67页 |
| 4.3.4 油桐种子不同发育时期含油率分析 | 第67-68页 |
| 4.3.5 LACS基因在种子中的相对表达量与油脂积累相关性分析 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 油桐LACS4基因的真核表达 | 第70-81页 |
| 5.1 植物材料和载体、菌株 | 第70页 |
| 5.2 酶和试剂 | 第70-71页 |
| 5.3 主要仪器设备 | 第71页 |
| 5.4 实验方法 | 第71-76页 |
| 5.4.1 目的基因含酶切位点引物设计 | 第71页 |
| 5.4.2 目的基因片段的制备 | 第71-73页 |
| 5.4.3 载体的制备 | 第73页 |
| 5.4.4 真核表达载体pCAMBIA1300-35S-LACS4的构建 | 第73页 |
| 5.4.5 农杆菌转化 | 第73-75页 |
| 5.4.6 野生型拟南芥培养 | 第75页 |
| 5.4.7 拟南芥的转化 | 第75-76页 |
| 5.5 结果与分析 | 第76-80页 |
| 5.5.1 真核超表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 5.5.2 PCR鉴定阳性农杆菌菌液 | 第77-78页 |
| 5.5.3 转油桐LACS4基因的拟南芥T1代筛选结果 | 第78-80页 |
| 5.6 讨论 | 第80-81页 |
| 6 结论与创新点 | 第81-84页 |
| 6.1 结论 | 第81-82页 |
| 6.2 创新点 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 附录A：硕士学习期间参与课题和研究成果 | 第92-93页 |
| 附录B：常用药品配方 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
