| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-32页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概况 | 第12-13页 |
| 1.2 PRRS病原学 | 第13-17页 |
| 1.3 PRRS流行病学 | 第17-18页 |
| 1.4 PRRS免疫学 | 第18-20页 |
| 1.5 临床症状和病理变化 | 第20-22页 |
| 1.6 PRRS疫苗 | 第22-25页 |
| 1.7 PRRSV检测方法 | 第25-30页 |
| 1.8 PRRS的净化 | 第30-31页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-45页 |
| 2.1 材料 | 第32-35页 |
| 2.1.1 病毒、菌株和载体 | 第32页 |
| 2.1.2 血清 | 第32页 |
| 2.1.3 试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第33-35页 |
| 2.1.5 主要耗材 | 第35页 |
| 2.1.6 主要设备 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-45页 |
| 2.2.1 PPRSV-Nsp2-N1N2基因的克隆 | 第35-38页 |
| 2.2.2 pET-32a-N1N2原核表达载体构建 | 第38-39页 |
| 2.2.3 PRRSV-Nsp2-N1N2基因蛋白的诱导表达 | 第39-42页 |
| 2.2.4 PPRSV-Nsp2-N1N2基因蛋白间接ELISA的建立 | 第42-43页 |
| 2.2.5 PPRSV-Nsp2-N1N2基因蛋白间接ELISA方法的鉴定 | 第43-45页 |
| 第三章 结果 | 第45-62页 |
| 3.1 PRRSV-Nsp2-N1N2基因的克隆与分析 | 第45-46页 |
| 3.1.1 N1N2基因PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD18-T-N1N2的构建 | 第46页 |
| 3.2 重组质粒pET-32a-N1N2的构建 | 第46-48页 |
| 3.3 融合蛋白pET-2a-N1N2的原核表达 | 第48-52页 |
| 3.3.1 重组菌表达结果 | 第48页 |
| 3.3.2 重组菌最佳诱导时间的优化 | 第48-49页 |
| 3.3.3 重组菌最佳诱导浓度的优化 | 第49-50页 |
| 3.3.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第50页 |
| 3.3.5 pET-32a-N1N2重组蛋白的纯化结果 | 第50-51页 |
| 3.3.6 纯化pET-32a-N1N2融合蛋白的Western blot检测 | 第51-52页 |
| 3.4 间接ELISA方法建立 | 第52-60页 |
| 3.4.1 间接ELISA最适反应条件的确定 | 第52-57页 |
| 3.4.2 间接ELISA阴阳临界值的确定 | 第57页 |
| 3.4.3 特异性检验 | 第57-58页 |
| 3.4.4 敏感性评价 | 第58-59页 |
| 3.4.5 符合性检验结果 | 第59页 |
| 3.4.6 批内和批间重复性试验结果 | 第59页 |
| 3.4.7 板内和板间重复性试验结果 | 第59-60页 |
| 3.5 应用建立的ELISA方法检测猪场血清 | 第60-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-68页 |
| 4.1 PRRSV疫苗毒株和野毒株鉴别 | 第62-63页 |
| 4.2 原核表达系统 | 第63-65页 |
| 4.3 间接ELISA方法的建立 | 第65-68页 |
| 4.3.1 间接ELISA方法特性 | 第65-66页 |
| 4.3.2 间接ELISA方法的优化 | 第66-67页 |
| 4.3.3 间接ELISA方法的初步应用 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第83页 |
