| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 转基因作物应用现状 | 第15-17页 |
| 1.3 Bt蛋白及作用机制 | 第17-33页 |
| 1.3.1 杀虫晶体蛋白(ICPs) | 第17-18页 |
| 1.3.2 Bt杀虫晶体蛋白作用机理 | 第18-21页 |
| 1.3.3 苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白(Vip) | 第21-23页 |
| 1.3.4 营养期杀虫蛋白的杀虫活性 | 第23-27页 |
| 1.3.5 营养期杀虫蛋白的作用机理 | 第27-31页 |
| 1.3.6 昆虫对Bt杀虫蛋白的抗性 | 第31-32页 |
| 1.3.7 vip3A基因在转基因作物中的应用 | 第32-33页 |
| 1.4 Bt抗性治理策略 | 第33-34页 |
| 1.4.1 高剂量庇护所策略 | 第33页 |
| 1.4.2 杀虫蛋白改造策略 | 第33-34页 |
| 1.4.3 新杀虫蛋白及转多基因策略 | 第34页 |
| 1.5 本研究的内容、目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 鳞翅目害虫取食Vip3AcAa后中肠组织病理变化 | 第36-50页 |
| 2.1 试验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第36-37页 |
| 2.1.2 供试杀虫蛋白 | 第37页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第37-38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-39页 |
| 2.2.1 样品收集 | 第38页 |
| 2.2.2 切片制备及观察 | 第38-39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 2.3.1 棉铃虫取食Vip3AcAa后中肠组织病理变化 | 第39-45页 |
| 2.3.2 斜纹夜蛾、甜菜夜蛾和小地老虎取食Vip3AcAa后中肠组织病理变化 | 第45-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 鳞翅目害虫中肠液对Vip3AcAa杀虫蛋白水解分析 | 第50-60页 |
| 3.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂及配置 | 第50-51页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 3.2 试验方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 中肠消化液提取 | 第51页 |
| 3.2.2 中肠总蛋白酶测定 | 第51-52页 |
| 3.2.3 类胰蛋白酶测定 | 第52页 |
| 3.2.4 类胰凝乳蛋白酶测定 | 第52页 |
| 3.2.5 中肠蛋白酶酶谱分析 | 第52页 |
| 3.2.6 中肠消化液水解Vip3AcAa杀虫蛋白 | 第52页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-58页 |
| 3.3.1 中肠蛋白酶活性 | 第53-54页 |
| 3.3.2 Vip3AcAa蛋白的表达与纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.3 中肠蛋白酶谱结果 | 第55-56页 |
| 3.3.4 中肠消化酶水解Vip3AcAa原杀虫蛋白结果 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 Vip3AcAa与鳞翅目害虫中肠BBMV特异性结合位点分析 | 第60-70页 |
| 4.1 试验材料 | 第60-61页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第60页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第60-61页 |
| 4.2 试验方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 中肠BBMV的制备 | 第61-62页 |
| 4.2.2 活化Vip3AcAa蛋白生物素标记 | 第62页 |
| 4.2.3 Biotin-Vip3AcAa与BBMV上受体结合分析 | 第62页 |
| 4.2.4 竞争结合试验 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-68页 |
| 4.3.1 Western blot检测活化Vip3AcAa蛋白生物素标记 | 第63-64页 |
| 4.3.2 BBMV上与Vip3AcAa结合受体检测 | 第64-66页 |
| 4.3.3 Biotin-Vip3AcAa竞争结合 | 第66-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 Vip3AcAa与Cry1Ac对鳞翅目害虫交互作用评价 | 第70-86页 |
| 5.1 试验材料 | 第70-72页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第70-71页 |
| 5.1.2 主要试剂及缓冲液配置 | 第71-72页 |
| 5.1.3 主要试验仪器 | 第72页 |
| 5.2 试验方法 | 第72-74页 |
| 5.2.1 生物测定 | 第72-73页 |
| 5.2.2 数据分析 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与分析 | 第74-84页 |
| 5.3.1 Vip3AcAa对Cry1Ac抗性棉铃虫的杀虫活性 | 第74-75页 |
| 5.3.2 Vip3AcAa与Cry1Ac混用对棉铃虫效果评价 | 第75-83页 |
| 5.3.3 Vip3AcAa对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾和小地老虎的杀虫活性 | 第83-84页 |
| 5.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第六章 转Vip3AcAa/Cry1Ac棉花对鳞翅目害虫抗性评价 | 第86-98页 |
| 6.1 试验材料 | 第87页 |
| 6.1.1 供试昆虫与棉花品种 | 第87页 |
| 6.1.2 主要试剂及仪器 | 第87页 |
| 6.2 试验方法 | 第87-90页 |
| 6.2.1 转基因棉花的鉴定 | 第87-90页 |
| 6.2.2 棉花抗虫性试验 | 第90页 |
| 6.2.3 数据分析 | 第90页 |
| 6.3 结果与分析 | 第90-94页 |
| 6.3.1 PCR,Western blot及Elisa鉴定CV163阳性植株 | 第90-92页 |
| 6.3.2 转基因棉花对Cry1Ac抗性棉铃虫的抗虫性 | 第92-93页 |
| 6.3.3 转基因棉花对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾和小地老虎的抗虫性 | 第93-94页 |
| 6.4 讨论 | 第94-98页 |
| 第七章 全文总结 | 第98-100页 |
| 7.1 主要结论 | 第98-99页 |
| 7.2 创新点 | 第99页 |
| 7.3 待开展工作 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 附录A | 第116-119页 |
| 附录B | 第119-121页 |
| 攻读博士学位期间获得的主要学术成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
