| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 植物的抗病机制 | 第14-15页 |
| 1.1.1 植物的防御反应 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植物的免疫反应 | 第15页 |
| 1.2 植物中的类受体蛋白激酶 | 第15-18页 |
| 1.2.1 类受体蛋白激酶的结构 | 第16页 |
| 1.2.2 类受体蛋白激酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.2.3 类受体蛋白激酶的功能 | 第17-18页 |
| 1.2.3.1 调节植物生长发育 | 第18页 |
| 1.2.3.2 参与植物的抗病反应 | 第18页 |
| 1.2.3.3 介导植物激素的信号转导 | 第18页 |
| 1.3 LRR型类受体蛋白激酶BAK1 | 第18-21页 |
| 1.3.1 BAK1的基本结构功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2 BAK1参与抗病信号转导 | 第19-20页 |
| 1.3.3 BAK1参与BR信号转导 | 第20-21页 |
| 1.3.3.1 油菜素甾醇BR | 第20页 |
| 1.3.3.2 BAK1介导BR信号的转导 | 第20-21页 |
| 1.4 MAPK级联反应 | 第21-22页 |
| 1.4.1 促分裂原活化蛋白激酶MAPK | 第21-22页 |
| 1.4.2 flg22诱导MAPK级联 | 第22页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第22页 |
| 1.6 研究的主要内容 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 苹果轮纹病病原菌Botryospheria dothidea | 第23页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 培养基配方 | 第23-24页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.6.1 MS培养基配制所需溶液 | 第24页 |
| 2.1.6.2 质粒DNA提取所需溶液 | 第24页 |
| 2.1.6.3 Western Blot所需溶液 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 植物总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 总RNA含量与纯度检测 | 第26页 |
| 2.2.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.5 普通PCR反应 | 第27页 |
| 2.2.6 半定量和荧光定量 | 第27-28页 |
| 2.2.7 基因克隆PCR反应 | 第28页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.9 PCR产物及质粒DNA酶切 | 第29页 |
| 2.2.10 PCR产物及质粒DNA切胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.11 连接反应体系 | 第30页 |
| 2.2.12 大肠杆菌感受态的转化 | 第30-31页 |
| 2.2.13 质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.14 大提质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.15 点突变 | 第33页 |
| 2.2.16 测序 | 第33页 |
| 2.2.17 农杆菌感受态的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.18 转化苹果叶片 | 第34页 |
| 2.2.19 转化‘王林’愈伤 | 第34页 |
| 2.2.20 Western Blot | 第34-36页 |
| 2.2.20.1 制备蛋白样品 | 第34-35页 |
| 2.2.20.2 SDS-PAGE电泳 | 第35页 |
| 2.2.20.3 转膜 | 第35-36页 |
| 2.2.20.4 免疫反应 | 第36页 |
| 2.2.20.5 显影和定影 | 第36页 |
| 2.2.21 MAPK活性检测 | 第36页 |
| 2.2.22 愈伤组织生长量的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.23 BR处理试验 | 第37页 |
| 2.2.24 轮纹病菌的培养与保存 | 第37页 |
| 2.2.25 接菌测试 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 苹果MdBAK1s基因的克隆与载体构建 | 第38-45页 |
| 3.1.1 MdBAK1s基因及RNAi片段的克隆 | 第38-39页 |
| 3.1.2 中间载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.1.2.1 MdBAK1s基因中间载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.1.2.2 RNAi中间载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.3 表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.1.3.1 MdBAK1s基因表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.3.2 RNAi表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.4 氨基酸序列分析 | 第45页 |
| 3.2 获得转基因愈伤及植株 | 第45-49页 |
| 3.2.1 获得稳定遗传的MdBAK1s超表达愈伤 | 第45-46页 |
| 3.2.2 获得稳定遗传的MdBAK1-1 超表达植株 | 第46-47页 |
| 3.2.3 获得抑制MdBAK1s表达的转基因愈伤 | 第47-49页 |
| 3.3 MdBAK1s转基因对苹果愈伤组织生长量的影响 | 第49页 |
| 3.4 MdBAK1s转基因对苹果愈伤组织响应BR的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 MdBAK1s转基因对苹果愈伤组织抗病性的影响 | 第50-51页 |
| 3.6 抑制MdBAK1s表达对苹果愈伤组织MAPK活性的影响 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 植物中重要的类受体蛋白激酶BAK1 | 第53页 |
| 4.2 苹果MdBAK1s基因及其互作蛋白预测 | 第53-54页 |
| 4.2.1 苹果MdBAK1s基因序列分析 | 第53-54页 |
| 4.2.2 苹果MdBAK1s互作蛋白的预测 | 第54页 |
| 4.3 MdBAK1s对苹果愈伤生长的影响 | 第54-55页 |
| 4.4 MdBAK1s可调控苹果愈伤的抗病性 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第71页 |
