| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 Cav-1的结构和功能 | 第12-14页 |
| 1.2 Cav-1与肿瘤的关系 | 第14-18页 |
| 1.2.1 Cav-1与能量代谢 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Cav-1与线粒体 | 第15-17页 |
| 1.2.3 Cav-1与ROS | 第17-18页 |
| 1.3 RalA与Cav-1之间的相互作用 | 第18-21页 |
| 1.3.1 RalA的结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2 RalA与癌症 | 第19-20页 |
| 1.3.3 RalA与Cav-1 | 第20-21页 |
| 1.4 本论文的研究意义和内容 | 第21-23页 |
| 第二章 RalA调控小窝的内吞及运动性 | 第23-57页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.2.1 细胞 | 第24页 |
| 2.2.2 siRNA,质粒与病毒 | 第24页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 实验试剂配制 | 第25-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 RalA活化实验 | 第30页 |
| 2.3.3 细胞分级分离实验 | 第30-31页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第31页 |
| 2.3.5 腺病毒或腺病毒感染细胞 | 第31页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.3.7 蛋白浓度测定 | 第32页 |
| 2.3.8 Western blot | 第32-34页 |
| 2.3.9 免疫荧光染色 | 第34页 |
| 2.3.10 荧光标记的BSA内吞实验 | 第34-35页 |
| 2.3.11 TIRF显微镜观察 | 第35页 |
| 2.3.12 PLD活化实验 | 第35页 |
| 2.3.13 统计分析 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-54页 |
| 2.4.1 BSA诱导的RalA的活化 | 第36-37页 |
| 2.4.2 RalA与Cav-1之间的相互作用 | 第37-39页 |
| 2.4.3 RalA对BSA内吞的影响 | 第39-46页 |
| 2.4.4 RalA对Cav-1与FilA相互作用的影响 | 第46-47页 |
| 2.4.5 PLD对BSA内吞的影响 | 第47-50页 |
| 2.4.6 PLD2对细胞膜小窝运动性的影响 | 第50-53页 |
| 2.4.7 PLD2促进PA的生成 | 第53-54页 |
| 2.5 讨论 | 第54-56页 |
| 2.6 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 Cav-1调节线粒体动态和线粒体自噬 | 第57-79页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 3.2.1 细胞 | 第58页 |
| 3.2.2 siRNA,质粒与病毒 | 第58-59页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第59页 |
| 3.2.4 实验试剂 | 第59页 |
| 3.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 3.3.1 线粒体形态的观察 | 第59-60页 |
| 3.3.2 质粒和siRNA的共转以及腺病毒感染 | 第60页 |
| 3.3.3 MNF (mitochondrial networking factor)的测定 | 第60-61页 |
| 3.3.4 Western blot | 第61页 |
| 3.3.5 免疫荧光染色 | 第61页 |
| 3.3.6 线粒体及细胞膜组分的分离 | 第61页 |
| 3.3.7 FRAP(fluorescence recovery after photobleaching) | 第61-62页 |
| 3.3.8 FRET(fluorescence resonance energy transfer) | 第62页 |
| 3.3.9 细胞凋亡 | 第62页 |
| 3.4 实验结果 | 第62-76页 |
| 3.4.1 Cav-1表达水平对线粒体形态和线粒体量的影响 | 第62-65页 |
| 3.4.2 Cav-1引起线粒体动态的改变 | 第65-67页 |
| 3.4.3 Cav-1作用于调节线粒体动态的关键蛋白 | 第67-70页 |
| 3.4.4 Cav-1调节Mfn2和Drp1定位的途径 | 第70-73页 |
| 3.4.5 Cav-1抑制引起线粒体自噬 | 第73-76页 |
| 3.5 讨论 | 第76-77页 |
| 3.6 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 RalA通过Cav-1调节线粒体功能和细胞能量代谢 | 第79-88页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 实验材料 | 第79-80页 |
| 4.2.1 细胞 | 第79-80页 |
| 4.2.2 siRNA,质粒与病毒 | 第80页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第80页 |
| 4.2.4 实验试剂 | 第80页 |
| 4.3 实验方法 | 第80-82页 |
| 4.3.1 ATP生成检测 | 第80-81页 |
| 4.3.2 H_2O_2检测 | 第81页 |
| 4.3.3 L-lactate检测 | 第81页 |
| 4.3.4 Western blot | 第81页 |
| 4.3.5 CMXROS线粒体标记及显微观察 | 第81-82页 |
| 4.4 实验结果 | 第82-86页 |
| 4.4.1 RalA和Cav-1的siRNA沉默效率 | 第82页 |
| 4.4.2 RalA和Cav-1调节线粒体膜电位 | 第82-83页 |
| 4.4.3 线粒体ATP生成的变化 | 第83-84页 |
| 4.4.4 细胞ROS水平的变化 | 第84-85页 |
| 4.4.5 细胞无氧糖酵解水平的变化 | 第85-86页 |
| 4.5 讨论 | 第86-87页 |
| 4.6 本章小结 | 第87-88页 |
| 第五章 全文结论与展望 | 第88-91页 |
| 5.1 结论 | 第88-89页 |
| 5.2 展望 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录 | 第103-105页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第105页 |
