| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·玉米弯孢叶斑病 | 第9-11页 |
| ·病原菌的生物学特性 | 第9页 |
| ·危害与防治 | 第9-11页 |
| ·玉米弯孢菌侵染过程 | 第11-14页 |
| ·识别与侵染结构的形成 | 第11-12页 |
| ·侵入寄主 | 第12-13页 |
| ·寄主体内定殖与扩展 | 第13-14页 |
| ·MAPK 信号传导途径 | 第14-15页 |
| ·Fus3/Kss1-MAPK 通路 | 第14-15页 |
| ·Slt2-MAPK 通路 | 第15页 |
| ·Hog1-MAPK 通路 | 第15页 |
| ·蛋白质互作研究方法 | 第15-21页 |
| ·酵母双杂交 | 第16-19页 |
| ·双分子荧光互补技术 | 第19-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 Clg2p 互作蛋白的筛选 | 第23-37页 |
| ·材料与方法 | 第23-33页 |
| ·菌株及质粒 | 第23-24页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第24-26页 |
| ·Clg2p 基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·pGBKT7-Clg2p 重组质粒构建 | 第28页 |
| ·pGBKT7-Clg2p 自激活和毒性检测 | 第28-29页 |
| ·cDNA 文库滴度检测、分析和库质粒的扩增 | 第29-31页 |
| ·文库质粒的转化 | 第31页 |
| ·转化子的筛选与回交验证 | 第31-32页 |
| ·阳性酵母克隆质粒的提取、片段测序与分析 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·菌丝 RNA 提取质量检测 | 第33页 |
| ·pGBKT7-Clg2p 构建 | 第33页 |
| ·重组质粒的自激活和毒性检测 | 第33-34页 |
| ·阳性酵母克隆最终筛选 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆测序与分析 | 第35页 |
| ·结论与讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 Clf 和 CIUase 生物信息学分析及其与 Clg2p 互作鉴定 | 第37-49页 |
| ·材料与方法 | 第37-40页 |
| ·质粒与菌株及植物材料 | 第37页 |
| ·培养基与试剂 | 第37页 |
| ·Clf 和 CIUase 蛋白序列获得与分析 | 第37-38页 |
| ·载体构建 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第39-40页 |
| ·热击法转化农杆菌 | 第40页 |
| ·PCR 鉴定重组质粒 | 第40页 |
| ·农杆菌转化洋葱表皮 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第40-44页 |
| ·酵母双杂交对 Clf 和 CIUase 与 Clg2p 互作鉴定 | 第44-45页 |
| ·BiFC 对 Clf 和 CIUase 与 Clg2p 互作鉴定 | 第45-46页 |
| ·结论与讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 Clf 和 CIUase 基因敲除、鉴定及功能分析 | 第49-73页 |
| ·材料与方法 | 第49-61页 |
| ·供试菌株 | 第49-51页 |
| ·菌丝 DNA 提取 | 第51-52页 |
| ·Double-joint PCR 构建 Clf 和 CIUase 同源敲除片段 | 第52-54页 |
| ·同源敲除片段的富集 | 第54页 |
| ·PEG 介导的基因敲除 | 第54页 |
| ·阳性转化子筛选与鉴定 | 第54-59页 |
| ·生物学性状分析 | 第59-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-71页 |
| ·Clf 和 CIUase 基因敲除盒构建 | 第61-63页 |
| ·转化子抗潮霉素稳定性筛选和分子检测 | 第63-66页 |
| ·生物学特性 | 第66-71页 |
| ·结论与讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
